HMGB-1試劑盒

HMGB-1試劑盒樣品收集、處理及保存方法：血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。檢測(cè)對(duì)象:人血清/血漿及相關(guān)液體實(shí)驗(yàn)方法:雙抗原夾心法進(jìn)行測(cè)

ELISA試劑分類: RD試劑盒,，GBD試劑盒，IBL試劑盒

  2,、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
  3,、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  4,、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過濾。
不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

上海乾思生物科技代理**進(jìn)口試劑盒,，經(jīng)銷眾多生命科學(xué)領(lǐng)域的ELISA試劑盒，生化試劑,，標(biāo)準(zhǔn)品，抗體,，培養(yǎng)基，血清,，為中國(guó)科研試劑供應(yīng)商之一，質(zhì)量被全國(guó)各大院?？蒲袡C(jī)構(gòu)認(rèn)可,，
并為Elisa試劑盒長(zhǎng)期供應(yīng)商.

上海乾思生物科技有限公司特別供應(yīng)進(jìn)口分裝elisa檢測(cè)試劑盒,，規(guī)格48T/96T,，2-8℃保存，快遞運(yùn)輸,。上海乾思生物成立于2007年，生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)進(jìn)口分裝的試劑盒產(chǎn)品,，有人試劑盒,、大鼠試劑盒,、小鼠試劑盒、雞試劑盒,、鴨試劑盒,、豚鼠試劑盒,、牛試劑盒,、兔子試劑盒,、羊試劑盒、山羊試劑盒,、綿羊試劑盒、魚試劑盒,、豬試劑盒,，并且提供試劑盒代測(cè)技術(shù)服務(wù)等,。

乾思生物科技有限公司

Shanghai biobaiye Biotech Co.,Ltd

供應(yīng)人elisa試劑盒,、大鼠elisa試劑盒、小鼠elisa試劑盒,、兔elisa試劑盒等。標(biāo)本有：血清、血漿,、細(xì)胞上清液,、尿液,、體液、灌洗液,、腦脊髓、心房水,、胸房水、組織等,。

種屬：人,、大鼠、小鼠,、兔子,、豬、犬、猴、馬、牛,、羊,、雞,、鴨,、魚等,。

常用生化試劑作用：   

1,、蛋白酶K：能水解消化蛋白質(zhì)，特別是與DNA結(jié)合的組蛋白,，在尿素和SDS中穩(wěn)定,。一般工作濃度是50—100μg/ml,，推薦反應(yīng)緩沖液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2。

2,、SDS：十二烷基硫酸鈉,，溶解細(xì)胞膜上的脂類與蛋白質(zhì),，因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜，并解離細(xì)胞中的核蛋白,，SDS 還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀。

3,、IPTG：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷， 常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等,。IPTG和乳糖的結(jié)構(gòu)相似，所以它和乳糖一樣,，可以與乳糖操縱元的阻遏蛋白結(jié)合,，

使阻遏蛋白的空間構(gòu)像變化,，四聚體解聚成單體，失去與操縱子特異性結(jié)合的能力,，從而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以轉(zhuǎn)錄合成利用乳糖的酶類,。與乳糖不同的是，

IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解,。常與X-GAL一起用于藍(lán)白斑篩選。作用*的誘導(dǎo)劑,，不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定。

4,、X-gal：5-溴-4-氯,。

樣品收集、處理及保存方法：血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。檢測(cè)對(duì)象:人血清/血漿及相關(guān)液體實(shí)驗(yàn)方法:雙抗原夾心法進(jìn)行測(cè)

ELISA試劑分類: RD試劑盒,，GBD試劑盒，IBL試劑盒

  2,、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
  3,、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  4,、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾,。
不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

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并為Elisa試劑盒長(zhǎng)期供應(yīng)商.

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供應(yīng)人elisa試劑盒、大鼠elisa試劑盒,、小鼠elisa試劑盒。

注：
1.  試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。  實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭,，避免交叉污染。
2.   加樣：加樣或加試劑時(shí),，請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時(shí),，前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大,，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育"時(shí)間,，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用多道移液器加樣,。
3.   孵育：為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā),；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4.   洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印,，避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5.  試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理,，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測(cè)溶液A工作液,、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用,，并使用相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,，盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10μl),，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6.  反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,，每隔10分鐘)，如顏色較深,，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù),。
7.  底物：底物請(qǐng)避光保存,，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射,。
    建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
    如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高,，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù),。
洗板方法
1.  手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要,，重復(fù)此過程數(shù)次。
2.  自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī),，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中,。
計(jì)算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),，OD值為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo))，在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析，如curve expert 1.3,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度。
 ◇      注意事項(xiàng)：
收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定,。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,，儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶?biāo)本,，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存,。避免反復(fù)凍融,。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí)，-20℃可保存1個(gè)月,。-70度可保存6個(gè)月,。部分標(biāo)本需添加抑肽酶。
◇      液體類標(biāo)本
標(biāo)本必須為液體,，不含沉淀,。包括血清、血漿,、尿液,、胸腹水、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿,。每個(gè)標(biāo)本量收集體積＝100ul×檢測(cè)種類,。
◇      血清：
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。收集上清,。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。
◇      血漿：
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10％(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
◇      尿液、胸腹水,、腦脊液：
用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。
◇      細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無菌管收集,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。
◇      組織標(biāo)本：
切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶),。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清置于-20度或- 70度保存,，如有必要,，可以將樣品濃縮干燥,。分裝后一份待檢測(cè),，其余冷凍備用。
寄標(biāo)本時(shí)需注明以下情況：
標(biāo)本編號(hào),；2,、所測(cè)項(xiàng)目,；3,、是否做復(fù)孔