Caco-2 Caco-2細胞 atcc標(biāo)準(zhǔn)菌株

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基因敲除技術(shù)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的,，是建立在基因同源重組技術(shù)基礎(chǔ)以及胚胎干細胞技術(shù)基礎(chǔ)上的一種新分子生物學(xué)技術(shù)?；蚯贸褪峭ㄟ^同源重組將外源基因定點整合入靶細胞基因組上某一確定的位點,，以達到定點修飾改造染色體上某一基因的目的的一種技術(shù)。本文對三種基因敲除技術(shù)作比較,，描述它們的優(yōu)缺點,。

基于胚胎干細胞的同源重組技術(shù)

1、優(yōu)勢：成熟、可靠,、精細是目前為止*一個可以滿足所有要求的打靶技術(shù)

2,、局限性：

A 需要ES細胞，目前只有小鼠有的ES細胞,，其它模式動物的ESC還不能實現(xiàn)大規(guī)模應(yīng)用,。

B 周期長、工作量大,、費用相對比較高

3,、可提供服務(wù)類型：

A 全基因敲除模式小鼠

B 條件性基因敲除模式小鼠

C 先全敲除再條件性敲除模式小鼠

D 基因敲入模式小鼠

E ROSA位點定點轉(zhuǎn)基因

TALEN技術(shù)

1,、優(yōu)勢：基因敲除效率高,，速度快，可實現(xiàn)多物種基因敲除

2,、局限性：

基因敲入效率較低,，多基因敲除困難，系統(tǒng)構(gòu)建相對復(fù)雜,，存在脫靶風(fēng)險

3,、可提供服務(wù)類型：

A 全基因敲除大/小鼠

B 全基因敲除細胞系

EGE系統(tǒng)

1、優(yōu)勢：基因敲除/敲入效率高,，速度快,，可實現(xiàn)多基因、多物種基因敲除/敲入,，系統(tǒng)構(gòu)建簡單

2,、局限性：

存在脫靶風(fēng)險，但通過選擇合適的sgRNA可以有效降低脫靶率,，In vivo脫靶可通過傳代去除.

3,、可提供服務(wù)類型：

A 全基因/條件性基因敲除大/小鼠

B 全基因/條件性報告基因敲除/敲入大/小鼠

C CRISPR/Cas9粒構(gòu)建

D 細胞系敲除/敲入

Caco-2 Caco-2細胞 atcc標(biāo)準(zhǔn)菌株--相關(guān)同類產(chǎn)品：5637細胞，MHCC97-L細胞,，2V6.11細胞,，HK-2細胞，A549細胞,，HL-60細胞,，BMSC細胞，BRL 3A細胞,，Caco-2細胞,，COV434細胞，F(xiàn)RhK-4細胞,，GES-1細胞,，SKOV3細胞，SKOV3/DDP細胞，SK-N-SH細胞,，ZR-75-30細胞,，PC-9細胞，CHO細胞,，A549細胞,，MKN-5細胞，L-02細胞,，DH82細胞,，A-431細胞，BGC-823細胞,，BV2細胞,，HT-22細胞，CCRF-CEM細胞,，MC38細胞,，CNE-1細胞，CTLL-2細胞,，T2細胞,，Bend.3細胞等，凡購買我公司任何一株細胞,，我公司免費贈送德國SERANA*胎牛血清(南美源,，優(yōu)等級別)試用裝30-50ML一瓶，更有禮品相送!

研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,，常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳,。胎牛血清使用錯誤或胎牛血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤,。冷凍細胞解凍后,，加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞,。培養(yǎng)溫度使用錯誤,。細胞置于–80℃太久。

研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,， 大都是因為離心過程操作上的失誤,，造成細胞的物理性損傷， 以及細胞流失,。建議細胞解凍后不要立刻離心,，應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。

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 快速識別與處理常見細胞污染的招術(shù)：

1、細菌：

識別：細菌在顯微鏡下為黑色細沙狀,，根據(jù)感染細菌的不同,，可有不同的外形，有球形,，鏈形,，桿形等。大家不必深究,。只要發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液渾濁變黃,，培養(yǎng)瓶頂部有一層細沙一樣的東西。就知道大事不好啦,。

處理：可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理,。可以用四環(huán)素,，慶大霉素,，或者鏈霉素,，前兩者的工作濃度是50 μg/mL;鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL,。其實，毛毛蟲說句實話,，一旦發(fā)生污染,，就已經(jīng)大勢已去了。如果細胞不是特別特別珍貴的話,，還是趁早扔了,，重起爐灶吧。所以,，zui重要的還是防范于未然,。做好培養(yǎng)間，CO2孵箱,，器皿和培養(yǎng)液的消毒滅菌工作,。在操作的時候，嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作規(guī)范,。

2,、霉菌：

識別：因為培養(yǎng)液是清亮的，所以霉菌污染非常難以早期發(fā)現(xiàn),，等發(fā)現(xiàn)時往往已經(jīng)為時過晚了,。培養(yǎng)液中慢慢地出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,，如同風(fēng)中柳絮,。細胞仍可生長,，但時間一長，細胞的狀態(tài)就變差,。

處理：細胞一旦被霉菌污染,，很難挽救，兩性霉素B或制霉菌素都于事無補,，建議果斷舍棄該污染細胞,，將環(huán)境*消毒。

采用酒精*底地擦洗一遍CO2孵箱,。然后再用新潔爾滅擦洗一遍,。把水盤里加上飽和量的硫酸銅。

3,、支原體：

識別：多為多邊形,，培養(yǎng)液一般會變渾濁。支原體感染細胞以后,，細胞病變不很明顯,，只是和你一起慢慢變老。支原體污染后,，可影響所有的細胞生長參數(shù),。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free,，實驗結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義,。

處理：沒有什么好處理的。直接扔了吧,。污染到其他的細胞就虧大發(fā)了,。還是那句話，預(yù)防為主,。

4,、黑蛟蟲：

識別：誰都不知道所謂的“黑膠蟲”是什么東西。據(jù)說是納米級的細菌,。低倍下為黑色點狀,，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去。培養(yǎng)液也是不渾的,，一般不會太影響,。但是如果太多了，也會影響細胞生長和實驗結(jié)果,。

處理：因為根本不知道這是什么物種,，所以也談不上什么處理方式。建議如果細胞有可能是此種污染的話,，可以增加細胞的種板密度,，以提高細胞的生存率,。

5、真菌：

識別：真菌污染和霉菌污染差不多,。一般培養(yǎng)液清亮,，所以很難早期發(fā)現(xiàn)。鏡下有時候象絲狀,，有時候象珊瑚狀,。慢慢地會長出很細的黑色絲狀物。這個時候,，已經(jīng)晚了,，細胞很難救活了。

處理：同霉菌污染一樣,，沒有什么好處理的,，直接扔了吧。然后*消毒滅菌培養(yǎng)間,，CO2孵箱,，器皿和培養(yǎng)液。

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