293H 293H細(xì)胞 atcc標(biāo)準(zhǔn)菌株
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基因敲除技術(shù)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的,是建立在基因同源重組技術(shù)基礎(chǔ)以及胚胎干細(xì)胞技術(shù)基礎(chǔ)上的一種新分子生物學(xué)技術(shù),?;蚯贸褪峭ㄟ^同源重組將外源基因定點(diǎn)整合入靶細(xì)胞基因組上某一確定的位點(diǎn),以達(dá)到定點(diǎn)修飾改造染色體上某一基因的目的的一種技術(shù)。本文對(duì)三種基因敲除技術(shù)作比較,,描述它們的優(yōu)缺點(diǎn),。
基于胚胎干細(xì)胞的同源重組技術(shù)
1、優(yōu)勢(shì):成熟,、可靠,、精細(xì)是目前為止*一個(gè)可以滿足所有要求的打靶技術(shù)
2、局限性:
A 需要ES細(xì)胞,,目前只有小鼠有的ES細(xì)胞,,其它模式動(dòng)物的ESC還不能實(shí)現(xiàn)大規(guī)模應(yīng)用。
B 周期長,、工作量大,、費(fèi)用相對(duì)比較高
3、可提供服務(wù)類型:
A 全基因敲除模式小鼠
B 條件性基因敲除模式小鼠
C 先全敲除再條件性敲除模式小鼠
D 基因敲入模式小鼠
E ROSA位點(diǎn)定點(diǎn)轉(zhuǎn)基因
TALEN技術(shù)
1,、優(yōu)勢(shì):基因敲除效率高,,速度快,可實(shí)現(xiàn)多物種基因敲除
2,、局限性:
基因敲入效率較低,,多基因敲除困難,系統(tǒng)構(gòu)建相對(duì)復(fù)雜,,存在脫靶風(fēng)險(xiǎn)
3,、可提供服務(wù)類型:
A 全基因敲除大/小鼠
B 全基因敲除細(xì)胞系
EGE系統(tǒng)
1、優(yōu)勢(shì):基因敲除/敲入效率高,,速度快,,可實(shí)現(xiàn)多基因、多物種基因敲除/敲入,,系統(tǒng)構(gòu)建簡單
2,、局限性:
存在脫靶風(fēng)險(xiǎn),但通過選擇合適的sgRNA可以有效降低脫靶率,,In vivo脫靶可通過傳代去除.
3,、可提供服務(wù)類型:
A 全基因/條件性基因敲除大/小鼠
B 全基因/條件性報(bào)告基因敲除/敲入大/小鼠
C CRISPR/Cas9粒構(gòu)建
D 細(xì)胞系敲除/敲入
293H 293H細(xì)胞 atcc標(biāo)準(zhǔn)菌株--相關(guān)同類產(chǎn)品:5637細(xì)胞,MHCC97-L細(xì)胞,,2V6.11細(xì)胞,,HK-2細(xì)胞,A549細(xì)胞,,HL-60細(xì)胞,,BMSC細(xì)胞,BRL 3A細(xì)胞,,Caco-2細(xì)胞,,COV434細(xì)胞,F(xiàn)RhK-4細(xì)胞,GES-1細(xì)胞,,SKOV3細(xì)胞,,SKOV3/DDP細(xì)胞,SK-N-SH細(xì)胞,,ZR-75-30細(xì)胞,,PC-9細(xì)胞,CHO細(xì)胞,,A549細(xì)胞,,MKN-5細(xì)胞,L-02細(xì)胞,,DH82細(xì)胞,A-431細(xì)胞,,BGC-823細(xì)胞,,BV2細(xì)胞,HT-22細(xì)胞,,CCRF-CEM細(xì)胞,,MC38細(xì)胞,CNE-1細(xì)胞,,CTLL-2細(xì)胞,,T2細(xì)胞,Bend.3細(xì)胞等,,凡購買我公司任何一株細(xì)胞,,我公司免費(fèi)贈(zèng)送德國SERANA*胎牛血清(南美源,優(yōu)等級(jí)別)試用裝30-50ML一瓶,,更有禮品相送!
研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。胎牛血清使用錯(cuò)誤或胎牛血清的品質(zhì)不佳,。解凍過程錯(cuò)誤,。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心,。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞,。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤。細(xì)胞置于–80℃太久,。
研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少,, 大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性損傷,, 以及細(xì)胞流失,。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。
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快速識(shí)別與處理常見細(xì)胞污染的招術(shù):
1,、細(xì)菌:
識(shí)別:細(xì)菌在顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,,有球形,,鏈形,桿形等,。大家不必深究,。只要發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液渾濁變黃,培養(yǎng)瓶頂部有一層細(xì)沙一樣的東西,。就知道大事不好啦,。
處理:可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理??梢杂盟沫h(huán)素,,慶大霉素,或者鏈霉素,,前兩者的工作濃度是50 μg/mL;鏈霉素的工作濃度是100 μg/mL,。其實(shí),毛毛蟲說句實(shí)話,,一旦發(fā)生污染,,就已經(jīng)大勢(shì)已去了。如果細(xì)胞不是特別特別珍貴的話,,還是趁早扔了,,重起爐灶吧。所以,,zui重要的還是防范于未然,。做好培養(yǎng)間,CO2孵箱,,器皿和培養(yǎng)液的消毒滅菌工作,。在操作的時(shí)候,嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作規(guī)范,。
2,、霉菌:
識(shí)別:因?yàn)榕囵B(yǎng)液是清亮的,所以霉菌污染非常難以早期發(fā)現(xiàn),,等發(fā)現(xiàn)時(shí)往往已經(jīng)為時(shí)過晚了,。培養(yǎng)液中慢慢地出現(xiàn)絮狀雜質(zhì),,鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物,如同風(fēng)中柳絮,。細(xì)胞仍可生長,,但時(shí)間一長,細(xì)胞的狀態(tài)就變差,。
處理:細(xì)胞一旦被霉菌污染,,很難挽救,兩性霉素B或制霉菌素都于事無補(bǔ),,建議果斷舍棄該污染細(xì)胞,,將環(huán)境*消毒。
采用酒精*底地擦洗一遍CO2孵箱,。然后再用新潔爾滅擦洗一遍,。把水盤里加上飽和量的硫酸銅。
3,、支原體:
識(shí)別:多為多邊形,,培養(yǎng)液一般會(huì)變渾濁。支原體感染細(xì)胞以后,,細(xì)胞病變不很明顯,只是和你一起慢慢變老,。支原體污染后,,可影響所有的細(xì)胞生長參數(shù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前,,必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free,,實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。
處理:沒有什么好處理的,。直接扔了吧,。污染到其他的細(xì)胞就虧大發(fā)了。還是那句話,,預(yù)防為主,。
4、黑蛟蟲:
識(shí)別:誰都不知道所謂的“黑膠蟲”是什么東西,。據(jù)說是納米級(jí)的細(xì)菌,。低倍下為黑色點(diǎn)狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,。培養(yǎng)液也是不渾的,,一般不會(huì)太影響。但是如果太多了,,也會(huì)影響細(xì)胞生長和實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
處理:因?yàn)楦静恢肋@是什么物種,,所以也談不上什么處理方式。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話,,可以增加細(xì)胞的種板密度,,以提高細(xì)胞的生存率。
5,、真菌:
識(shí)別:真菌污染和霉菌污染差不多,。一般培養(yǎng)液清亮,所以很難早期發(fā)現(xiàn),。鏡下有時(shí)候象絲狀,,有時(shí)候象珊瑚狀。慢慢地會(huì)長出很細(xì)的黑色絲狀物,。這個(gè)時(shí)候,,已經(jīng)晚了,細(xì)胞很難救活了,。
處理:同霉菌污染一樣,,沒有什么好處理的,直接扔了吧,。然后*消毒滅菌培養(yǎng)間,,CO2孵箱,器皿和培養(yǎng)液,。
細(xì)胞種類較多,,本展臺(tái)無法一一體現(xiàn),以上是我司部分產(chǎn)品,,若沒有看到您需要的細(xì)胞,,請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉茫稍儭?/span>