elisa試劑盒應(yīng)用及前準(zhǔn)備

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定（ Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ）的簡(jiǎn)稱,。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問世以來,，發(fā)展十分迅速,，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。

Elisa試劑特點(diǎn)——Elisa試驗(yàn)敏感性高,，特異性強(qiáng),，重復(fù)性好。
Elisa試劑穩(wěn)定,、易保存,，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素,。

ELISA原理——ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù),。由于抗原,、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后,，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。在實(shí)際應(yīng)用中,，通過不同的設(shè)計(jì),，具體的方法步驟可有多種,。即:用于檢測(cè)抗體的間接法（圖a）、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等,。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法,。

ELISA試劑盒檢測(cè)前準(zhǔn)備工作
1. 請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫,。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋（1:25）,。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,，屬于正?，F(xiàn)象，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液,。（加熱溫度不要超過50℃）使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫,。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 加入標(biāo)準(zhǔn)品&標(biāo)本稀釋液1.0ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，靜置10分鐘,，待其充分溶解后,，輕輕混勻（濃度為5000 pg/ml）,。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋）,。建議配制成以下濃度： 2500、1250,、625,、312.5、156.2,、78.1,、39.05、0 pg/ml,。樣品稀釋液直接作為空白孔 0 pg/ml,。如配制2500pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）5000pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的EP管中，混勻即可,，其余濃度以此類推,。
4. 生物素化抗體工作液：實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μl/孔計(jì)），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100-200μl,。使用前15分鐘,，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體（1:100）成工作濃度。當(dāng)日使用,。
5. 酶結(jié)合物工作液：實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μl/孔計(jì)）,，實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制 100-200μl。使用前15分鐘,，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體（1:100）成工作濃度,。當(dāng)日使用,。

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