關(guān)鍵詞:免疫組化實驗技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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免疫組化實驗技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌： http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>免疫組織化學(xué)技術(shù)按照標(biāo)記物的種類可分為免疫熒光法,、免疫酶法,、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等,。
1.洗載玻片:將載玻片置于重鉻酸鉀和濃H2SO4混合液中,目的是為了是載玻片上的硅膠等除去,同時使一些肉眼看不見的凹凸不平的表面變平整,便于組織吸附,然后置于清水中清洗,除去殘余的重鉻酸鉀和濃H2SO4(大約沖一個小時左右),再將載玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37°C溫箱中,，將多聚賴氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys帶正電,，而大多數(shù)的組織帶負(fù)電荷，從而產(chǎn)生吸附作用,。
2.包埋組織:先在鐵模具中加入一些液態(tài)石蠟,，先稍微冷卻，然后再將待包埋的組織置于石蠟之中,，并排列整齊,，再將塑料模具盒蓋上，zui后加入少許液體石蠟，進行冷凍,，使石蠟變成固態(tài),。
3.切片：將包埋好的組織從模具上取下來，并置于石蠟切片機上,，切片機通過調(diào)節(jié)上下左右來來使組織和切割方向一致,，然后調(diào)節(jié)切片的厚度，一般為5µm,如果比較難切,，則可以適當(dāng)調(diào)整厚度,，用毛筆將切割的載玻片向外拉，并用小鑷子將包含有完整組織的載玻片置于40°C溫水中,。
4.撈組織：當(dāng)組織載玻片置于40°C溫水中之前,，要先將水浴中的氣泡趕走，以免氣泡受熱上浮而貼到組織上,，組織受熱展開,，是組織不起皺紋，用載玻片撈組織時,，一般取載玻片的下1/3或者下1/2一般每種組織撈5-6張,，其中2-3張是備用的，每張載玻片上通常撈兩份組織,，做對照使用,，這樣形成的誤差就比較小了，而且撈載玻片的時候方向一致,，以便觀察,，再將撈出來的載玻片置于架子上，放入37°C溫箱中烘干,。
5.脫蠟：依次將載玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精,，起脫蠟作用的主要是二甲苯,依據(jù)的是相似相溶的原理.一般在每個試劑中放10min,天氣熱可以少放幾分鐘,相反,天氣較冷的話,就要適當(dāng)延長脫蠟時間,一般為12-15min.
6.抗原修復(fù)：脫蠟后在清水中沖洗一段時間，加入3%H2O2浸泡10min,，從而除去內(nèi)源性的過氧化氫酶,，然后倒掉H2O2，在清水中洗兩次,，再加入檸檬酸緩沖液,，放入微波爐中蒸煮3min（中火），一般剛到沸騰即可,，冷卻至室溫,，然后再蒸煮一次，冷卻至室溫,，蒸煮的目的是為了使抗原的位點暴露出來,。
7.血清封閉：冷卻至室溫后,，將檸檬酸緩沖液倒掉，水洗2次,，并將載玻片置于PBS中5min,，洗2次，擦干組織周圍的PBS液,，馬上加上血清,，使一些非特異性的位點封閉起來，然后放入37°C溫箱中半小時,。血清稀釋10倍（900µlPBS：100µl血清封閉液）,。
8.加一抗：將溫箱中的載玻片取出，用吸水紙擦干載玻片反面和正面組織周圍的血清,，加一抗,，如果做對照實驗，就在對照的組織上加PBS,。加完一抗后于4°C冰箱中保存,。
9.加二抗：將載玻片從冰箱中取出，放入PBS中洗3次,，每次5min,，擦干組織周圍的PBS后加上二抗,然后置于37°C溫箱中半小時。
10.加SABC:將片子從溫箱中取出, 放入PBS中洗3次,，每次5min,，擦干組織周圍的PBS后加上SABC, 然后置于37°C溫箱中半小時。SABC稀釋100倍（990µlPBS：10µlSABC）,。
11.加顯色劑：將片子從溫箱中取出, 放入PBS中洗3次,，每次5min，擦干組織周圍的PBS后加上顯色劑,。（顯色劑的配置：在1ml水中加1滴顯色劑A,，搖勻，然后加1滴顯色劑B,，搖勻,，再加1滴顯色劑C，搖勻） A：DAB B：H2O2 C：磷酸緩沖液
12.復(fù)染：將顯色后的片子用清水沖洗一段時間后,，浸泡于蘇木精中染色,，一般動物組織為半分鐘，植物組織3-5min,。
13.脫水：將復(fù)染后的片子置于水中沖洗后,，依次將載玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。每個試劑中放置2min,，zui后浸泡在二甲苯中，搬到通風(fēng)柜中。
14.封片：用中性樹膠滴在組織旁邊,，再用蓋玻片蓋上,，要先放平一側(cè)，然后輕輕放下另一側(cè),，以免產(chǎn)生氣泡,，封好片子后置于通風(fēng)柜中晾干。
免疫組化（Elivision二步法）：
（1）石蠟切片置于67℃烘箱中,，烘片2小時,，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次,，每次3分鐘（3×3’）,。
（2）取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中,，微波加熱至沸騰,，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中,，中檔微波處理10分鐘,，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片,，先用蒸餾水沖洗兩次,，之后用PBS沖洗2×3’。(注：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的,，視具體情況而定)
（3）每張切片加1滴3% H2O2,，室溫下孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性,。PBS沖洗3×3’,。
（4）除去PBS液，每張切片加1滴相應(yīng)的*抗體（相應(yīng)稀釋倍數(shù)）,，室溫下孵育2小時,。
（5）PBS沖洗3×5’。除去PBS液,，每張切片加1滴聚合物增強劑（試劑A）,，室溫下孵育20分鐘。PBS沖洗3×3’,。
（6）除去PBS液,，每張切片加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物（試劑B），室溫下孵育30分鐘,。PBS沖洗3×5’
（7）除去PBS液,，每張切片加1滴新鮮配制的DAB液,，顯微鏡下觀察5分鐘。
（8）蘇木素復(fù)染,，0.1%HCl分化,，自來水沖洗，藍(lán)化,，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,，二甲苯透明，中性樹膠封固,，晾干后觀察,。
