關(guān)鍵詞:免疫沉淀技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌免疫沉淀技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
免疫沉淀技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>材料
1,，  蛋白A 或蛋白G
2,，  一抗
3，  免疫沉淀緩沖液：20 mM 磷酸鈉, pH 7.5, 500 mM NaCl, 0.1% SDS, 1% NP40, 0.5% 脫氧膽酸鈉 and 0.02% *.
（> NOTE: 50 mM 醋酸鈉緩沖液, pH 5.0,. 500 mM NaCl, 0.1% SDS, 1% NP-40 and 0.02%* 也可作為免疫沉淀的緩沖液,，能提高蛋白G的結(jié)合功效）
4,，  洗脫液：0.1 M 甘氨酸-HCl buffer, pH 2.5
5，  SDS-PAGE 上樣緩沖液 (pH 6.8)： 2% SDS, 62.5 mM Tris 堿, 10% 甘油, 2-5% 
實驗流程為：
1．用磷酸鹽緩沖液洗30塊10 cm培養(yǎng)板上的適宜細胞,。刮去每塊板上的細胞到1 ml冰冷的EBC裂解緩沖液中,。
2．將每毫升細胞懸液轉(zhuǎn)移到微量離心管中，在微量離心機上4℃以zui大速度離心15 min,。
3．收集上清（約30 ml）并加入30μg的適當(dāng)抗體,，4℃搖動免疫沉淀物1 h。
4．加入0.9 ml的蛋白質(zhì)A-Sepharose 懸液,，4℃搖動免疫沉淀物30 min,。
5．用含900 mmol/L NaCl的NETN洗蛋白A-Sepharose混合物，再重復(fù)洗5次,。zui后,，用NETN洗一次。
6．吸出混合物的液體部分,。加入800μl的1×SDS膠加樣緩沖液到球珠中,，煮沸4 min,。
7．將樣品加入到大孔的不連續(xù)SDS-PAGE梯度膠中，在10 mA的恒定電流下電泳,。
8．通過考馬斯藍染色觀察蛋白質(zhì)泳帶,。
9．從膠上切下目標(biāo)帶，將其放到微量離心管中,，用1ml 50%乙腈洗兩次,，每次3 min。
10． 用胰蛋白酶消化膠中的蛋白質(zhì),，再將肽電洗脫,。
11． 通過窄孔液相色譜分離肽。將收集的肽在ABI 477A或494A機器上進行自動Edman降解測序,。
在免疫共沉淀實驗中要保證實驗結(jié)果的真實性,，應(yīng)注意以下幾點：
(1) 確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白,，單克隆抗體的使用有助于避免污染的發(fā)生,；
(2) 要確保抗體的特異性,，即在不表達抗原的細胞溶解物中添加抗體后不會引起共沉淀,；
(3) 確定蛋白間的相互作用是發(fā)生在細胞中，而不是由于細胞的溶解才發(fā)生的,，這需要進行蛋白質(zhì)的定位來確定,。