關鍵詞:慢病毒載體構建,，包裝，純化技術服務|實驗技術服務
簡介：世界*品牌慢病毒載體構建，包裝,，純化技術服務|實驗技術服務原裝,，質量保證,*。
慢病毒載體構建,，包裝,，純化技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數據真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,，客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果,。
產品品牌：   http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程：
慢病毒是逆轉錄病毒的一種,，具有逆轉錄病毒的基本結構和特性：整合入宿主細胞基因組，長期表達,，可用于轉基因動物制備,；但也有不同于逆轉錄病毒的組份和特性：比逆轉錄病毒具有更高的滴度，不僅可以感染分裂期細胞,，更重要的,，還能感染非分裂期的細胞。利用慢病毒載體,，可以研究啟動子的調控,、過表達特定基因或沉默特定基因。
（一） 實驗流程（1和2為并列步驟）
1.慢病毒過表達質粒載體的構建
設計上下游特異性擴增引物,，同時引入酶切位點,，PCR(采用高保真KOD酶，3K內突變率為0%)從模板中（CDNA質?；蛘呶膸欤┱{取目的基因CDS區(qū)（coding sequence）連入T載體,。將CDS區(qū)從T載體上切下，裝入慢病毒過表達質粒載體,。
2.慢病毒干擾質粒載體的構建
合成siRNA對應的DNA頸環(huán)結構,，退火后連入慢病毒干擾質粒載體
3. 慢病毒載體的包裝與濃縮純化
制備慢病毒穿梭質粒及其輔助包裝原件載體質粒，三種質粒載體分別進行高純度無內毒素抽提,，共轉染293T細胞,，轉染后6 h 更換為*培養(yǎng)基，培養(yǎng)24和48h后,，分別收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液,，病毒上清液通過超離心濃縮病毒,。
(二) 實驗材料
2.1慢病毒載體、包裝細胞和菌株
該病毒包裝系統(tǒng)為三質粒系統(tǒng),，組成為pspax2, pMD2G, pLVX-IRES-ZsGreen1/pLVX-shRNA2,。其中質粒上的ZsGreen1表達框能表達綠色熒光蛋白（GFP）。
慢病毒載體構建包裝實驗流程如下：
1. 根據目的基因相關信息（序列,，序列號等）,，構建含有外源基因或siRNA的重組載體；
2. 對于測序正確的重組質粒,，提取和純化高質量的不含內毒素的重組質粒,；
3. 使用重組載體和病毒包裝質粒共轉染293T 細胞，進行病毒包裝和生產,，收集病毒液,；
4. 濃縮、純化病毒液,；
5. 用高質量的病毒液感染細胞,；
6. 通過定量PCR測定病毒滴度（高滴定方法）和Western 分析實驗結果；
7. 用高質量的病毒液感染宿主細胞,；檢測基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用藥物進行穩(wěn)定轉染細胞株的篩選,，通常狀況下，篩選的細胞克隆株具有長期的表達穩(wěn)定性,。病毒液足夠用于一般的動物活體實驗,。