關(guān)鍵詞:慢病毒載體構(gòu)建,，包裝，純化|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界*品牌慢病毒載體構(gòu)建,，包裝,，純化|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*,。
慢病毒載體構(gòu)建,，包裝，純化|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
PI 染色操作步驟
1、將單細(xì)胞懸液加入2ml圓底離心管中,，離心，1500rpm , 5min,，棄上清液,。
2,、加入PBS 1ml離心洗滌1次，棄上清,。
3,、加入2ml預(yù)冷的70%酒精，4℃固定30min,，或是-20℃固定,。
4、離心,，棄上清液,。
5、用1×PBS 1ml洗滌1次,，離心,。
6、加入RNase A (工作濃度20ug/ml)于500ul 1×PBS中,，37℃孵育30min,，離心。
7,、用1×PBS 1ml洗滌1次,，離心。
8,、加入PI(工作濃度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中,，室溫避光孵育30min。
9,、混勻,，過(guò)300目篩網(wǎng)，置流式管中,， 4℃冰箱保存,，待測(cè)。
細(xì)胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
1,、將單細(xì)胞懸液加入2ml圓底離心管中,，離心，1500rpm,，5min,，棄上清液。
2,、以冷PBA 1ml,，離心洗滌，棄上清液。
3,、加入用PBA稀釋的熒光素標(biāo)記的抗體200ul,。用微量移液器輕輕吹打混勻，4℃或置冰上孵育30min-1h,。
4,、離心棄上清液。
5,、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次,，以除去未結(jié)合的多余抗體成分。
6,、向細(xì)胞中加入冷PBS 500ul,吹打混勻,，置流式管中，4℃避光保存,，待測(cè),。
胞內(nèi)直接免疫熒光染色操作步驟
1、將單細(xì)胞懸液加入2ml圓底離心管中,，離心,，1500rpm , 5min，棄上清液,。
2,、用1×PBS1ml洗滌1次，離心,。
3,、4%PFA 1ml，4℃固定30min,。
4,、用1×PBS1ml洗滌1次，離心,。
5,、0、1% Triton-100 1ml, 室溫10min,。
6,、用1×PBS1ml洗滌1次，離心,。
7,、加入用PBA稀釋的熒光素標(biāo)記的抗體200ul，用微量移液器輕輕吹打混勻,，4℃或置冰上孵育30min-1h,。
8、離心棄上清液。
9,、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次,，以除去未結(jié)合的多余抗體成分。
10,、向細(xì)胞中加入冷PBS500ul,吹打混勻，置流式管中,，4℃避光保存,，待測(cè)。
備注：                                                
1,、RNase A：貯液濃度：1mg/ml,；
工作液配制：加1 mg/ml貯液 10ul于500ul 1×PBS中，使終濃度為 20ug/ml,。
2,、PI：貯液濃度：2、5mg/ml,；       
工作液配制：加2,、5 mg/ml貯液 10ul于500ul 1×PBS中，使終濃度為 50ug/ml,。
3,、PBA：即PBS加1-2% 牛血清白蛋白，加0,、1%疊氮鈉,。
4、檢測(cè)樣品細(xì)胞濃度1x106 /ml,。
慢病毒載體構(gòu)建包裝實(shí)驗(yàn)流程如下：
1.根據(jù)目的基因相關(guān)信息（序列,，基因序列號(hào)等），構(gòu)建含有外源基因或序列的重組載體,；
2.對(duì)于測(cè)序正確的重組質(zhì)粒,，提取和純化高質(zhì)量（不含內(nèi)毒素）的重組質(zhì)粒；
3.使用重組載體和慢病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,，進(jìn)行病毒包裝并收集上清液,；
4.通過(guò)超濾和超速離心濃縮和純化病毒；
5.用病毒液感染293T細(xì)胞,，測(cè)定病毒滴度,；