關(guān)鍵詞:基因組文庫(Genomic Library)構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌基因組文庫(Genomic Library)構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
基因組文庫(Genomic Library)構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費,。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：基因組文庫(Genomic Library)構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)   http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>基因組DNA文庫包括了基因組所有順序的隨機克隆片段,。一個好的基因組DNA文庫的大小應(yīng)足夠大,，以便包括所有的基因DNA順序。DNA克隆片段也應(yīng)足夠大,，其中包括整個基因,、連接基因及它們穩(wěn)定形式所要的側(cè)翼順序。為了獲得高的克隆效率和較大的插入片段,，λ噬菌體載體和質(zhì)粒經(jīng)常被使用構(gòu)建基因組DNA文庫,。λ噬菌體文庫易于操作，噬菌體載體上有多克隆位點,。λ噬菌體能容納10-50kb插入DNA,，載體類型應(yīng)根據(jù)所要基因組DNA的大小和用途來選擇。
構(gòu)建一個基因組DNA文庫的基本步驟：
①分離純化基因組DNA,；
②切割DNA成合適大小的片段以用于克?。?br>③載體DNA的制備,；
④把基因組DNA段和載DNA連接,；
⑤包裝重組分子；
⑥測定入噬菌體滴度,；
⑦擴增DNA文庫,；
⑧評估文的質(zhì)量。
基因組文庫構(gòu)建步驟：1,、載體： 
l噬菌體：48.5kb,插入型(zui多可容納9kb),、取代型(可容納 38-51kb，zui適19-20kb),， EMBL, Charon 粘性質(zhì)粒(Cosmid)：4-6kb, 質(zhì)粒+噬菌體的性質(zhì),，可容納大片段的外源基因，zui多可容納46kb,。 酵母人工染色體克隆體系（YAC,，Yeast Artificial Chromosome  Cloning System） 插入大小200—1000kb 2、 載體DNA的制備： 高分子量的外源DNA 100-150kb載體DNA酶切反應(yīng)-----載體臂的純化-----載體脫磷處理（常用BamHI）   （蔗糖密度梯度離心）  （堿性磷酸酶） 3,、連接和包裝：外源片段與兩臂之間的比例,，包裝蛋白 4,、感染宿主菌：選擇合適的宿主菌，LE392, NM538, NM539, KW251等 5,、基因組文庫的保存和擴增： 6,、測滴度，要在106fu以上
7,、保存：氯仿4℃,，7% DMSO -70℃
需要注意：
(1)電泳時，要選用合適的DNA Ladder,，以保證電泳后可以準(zhǔn)確定位所需分子量的DNA,。
(2)電泳以后，應(yīng)盡量縮短用紫外光照射目標(biāo)DNA的時間,，否則會顯著降低克隆效率,。
(3)回收DNA的時候，應(yīng)該要避免過度離心,，以防止DNA被剪切,，降低文庫質(zhì)量。
方法
1,。將50μl BAC轉(zhuǎn)化菌的培養(yǎng)物接種到500ml含12,。5μg/ml氯霉素的LB液體培養(yǎng)基中，37℃ 震蕩(280rpm)培養(yǎng)12到16小時,。
2,。2500g，4℃,，離心15min,，收集菌體。
3,。用100ml冰預(yù)冷的STE重新懸浮細菌沉淀,。按步驟2方法離心收集細菌。
4,。用24ml含RNase(100μg/ml)的堿性裂解液I溶解細菌,。加溶菌酶至終濃度為1mg/ml。
5,。加入24ml新鮮配置的堿性裂解液II。蓋緊離心瓶蓋,，輕輕翻轉(zhuǎn)瓶子數(shù)次,，使內(nèi)容物*混勻，冰裕5min,。
6,。加入24ml冰預(yù)冷的堿性裂解液III，蓋緊瓶蓋，輕輕翻轉(zhuǎn)瓶子數(shù)次,，使內(nèi)容物*混勻,，置冰上5min。
7,。15000g,，4℃，離心10min,，將上清轉(zhuǎn)移到另一離心瓶中,，棄沉淀。
8,。加等體積的酚：氯仿,。輕輕翻轉(zhuǎn)離心瓶數(shù)次，混勻,。3000g,，室溫離心15min。
9,。將水相移至另一離心瓶中,，加入等體積的異丙醇，翻轉(zhuǎn)離心瓶數(shù)次,，混勻,。
10。15,，000g,，室溫離心15分鐘，回收核酸沉淀,。
11,。棄上清，用20ml 70%乙醇漂洗沉淀,。
12,。棄乙醇，風(fēng)干使乙醇揮發(fā)殆盡,。
13,。小心將BAC DNA沉淀溶于0。2ml TE (pH8,。0) 中,。