Western Blotting服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)

時間：2015/7/1閱讀：220

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簡介：世界*品牌Western Blotting服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*,。
Western Blotting服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費,。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,，我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗。另一方面,，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌： http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>免疫蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法,。寶賽生物為您提供全套的常規(guī)免疫印記技術(shù)服務(wù)，同時本公司采用**的LICOR Odyssey雙色紅外激光成像系統(tǒng)和雙色熒光染料標記的二抗推出高靈敏度的紅外激光免疫印跡服務(wù),。與常規(guī)化學(xué)發(fā)光方法比較,，靈敏度可達到皮克級（pg），還具有雙色成像,、定量,、成像清晰的優(yōu)點。同時具備功能強大的軟件系統(tǒng),，可快速判定樣品分子量大小并進行定量分析,。
1.樣品收集
1）培養(yǎng)的細胞
貼壁和懸浮細胞收集方式不同，細胞裂解液種類各異,，推薦含SDS的凝膠加樣緩沖液裂解,，煮沸即可。
2）動物組織
與細胞不同,，組織塊由于體積較大,，須預(yù)先經(jīng)破碎勻漿處理。
2．樣品定量
樣品電泳前需測定蛋白濃度,，以便保證上樣量一致,，有利于后續(xù)定量或半定量分析。常用的蛋白質(zhì)濃度測定方法有好多種,，其靈敏度和所需時間不同,，且不同的方法會受不同干擾物質(zhì)的影響，實驗者可根據(jù)樣品制備方法（裂解液成分,、去垢劑和還原劑種類等）自行選擇,。
注意事項：
a. 應(yīng)盡量避免引入影響后續(xù)定量的雜蛋白（如細胞培養(yǎng)液、蛋白酶抑制劑等）及其他干擾物質(zhì),；
b. 樣品濃度應(yīng)適中,，1×SDS凝膠加樣緩沖液建議用量：貼壁細胞按10cm2培養(yǎng)皿/0.1ml,，懸浮細胞按5×106細胞/0.1ml比例加入；
c. SDS對蛋白質(zhì)變性和電泳分離至關(guān)重要,，濃度應(yīng)控制在2-10%之間,，并根據(jù)具體需要調(diào)整；
d. 制備好的樣品可以在-20℃保存,，但時間不宜過長,，并避免反復(fù)凍融，否則蛋白會發(fā)生降解,；
e. 內(nèi)參對實驗結(jié)果至關(guān)重要,，應(yīng)選擇合適的內(nèi)參。
Western印跡含一系列步驟,，包括：
?? 用聚丙烯酰胺凝膠分離蛋白樣品,。
?? 將膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到膜上。
?? 鑒定膜上特定蛋白,。
主要實驗步驟如下：
1. 蛋白質(zhì)抽提
2. 蛋白質(zhì)定量
3. 變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE)
4. 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜,；
5. 膜的封閉和一抗抗體孵育；
6. Rockland熒光標記二抗孵育
7. LICOR Odyssey雙色紅外激光成像系統(tǒng)掃描
8. Odyssey軟件數(shù)據(jù)分析
9. 提供實驗報告,，包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結(jié)果的相關(guān)圖表

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