關(guān)鍵詞:RNAi質(zhì)粒載體構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌RNAi質(zhì)粒載體構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*。
RNAi質(zhì)粒載體構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi),。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí),，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn)。另一方面,，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌： http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒?yàn)流程：
近年來的研究表明,一些短片斷的雙鏈RNA可以通過促使特定基因的mRNA降解來,、特異的阻斷體內(nèi)特定基因表達(dá),誘使細(xì)胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型, 稱為RNA干擾（RNA interference,RNAi）.siRNA（small interfering RNAs）就是這種短片斷雙鏈RNA分子,能夠以序列同源互補(bǔ)的mRNA為靶目標(biāo),降解特定的mRNA.RNAi的發(fā)現(xiàn)具有劃時(shí)代的意義,它不僅深入揭示 了細(xì)胞內(nèi)基因沉默的機(jī)制,而且它還是后基因組時(shí)代基因功能分析的有力工具,極大地促進(jìn)了人類揭示生命奧秘的進(jìn)程.現(xiàn)在越來越多的研究人員開始采用RNAi 來研究生物體的基因表達(dá).RNAi技術(shù)可廣泛應(yīng)用到包括功能基因組學(xué),藥物靶點(diǎn)篩選,細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路分析,疾病治療等等.
目前為止較為常用的5種制備siRNAs的方法包括：
·化學(xué)合成
·體外轉(zhuǎn)錄
·長片斷dsRNAs經(jīng)RNase III 類降解 (e.g. Dicer, E. coli, RNase III)
·siRNA表達(dá)載體或者病毒載體在細(xì)胞中表達(dá)siRNAs
·PCR制備的siRNA表達(dá)框在細(xì)胞中表達(dá)
獲得高純度的siRNA產(chǎn)物是進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的*步,而轉(zhuǎn)染的效率則是非常關(guān)鍵的因素.
RNAi表達(dá)載體的構(gòu)建
1. 目的基因的確定
2,、設(shè)計(jì)siRNA靶序列
基本步驟：
（1）將100μl感受態(tài)細(xì)胞于冰上解凍.
（2）取5μl連接產(chǎn)物加入到感受態(tài)細(xì)胞中,輕輕旋轉(zhuǎn)幾次以 混勻內(nèi)容物. 在冰上放置30分鐘.
（3）將管放入預(yù)加溫到42℃的水浴中,熱激90秒.快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻1~2分鐘.
（4）每管中加700μl LB培養(yǎng)基,37℃振蕩培養(yǎng)1小時(shí),進(jìn)行復(fù)蘇.
（5）室溫4,000rpm離心5分鐘,棄去上清后,用剩余100μl培養(yǎng)基重懸細(xì)胞并涂布到含抗性的LB瓊脂平板表面.注意：細(xì)胞用量應(yīng)根據(jù)連接效率和感受態(tài)細(xì)胞的效率進(jìn)行調(diào)整.
（6）將平板置于室溫直至液體被吸收.
（7）倒置平皿,于37℃培養(yǎng),12~16小時(shí)后可出現(xiàn)菌落.
RNAi：（RNA interference）RNA干擾
內(nèi)源性或外源性雙鏈RNA(dsRNA)介導(dǎo)的能誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)與其序列同源的特異基因表達(dá)沉默或抑制的效應(yīng),誘使細(xì)胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型,稱為RNA干擾,它也是體內(nèi)抵御外在感染的一種重要保護(hù)機(jī)制.
siRNA ：(small interfering RNAs)小干擾RNA
由長dsRNA裂解而成的一種19-25nt的短片斷雙鏈RNA分子,能夠以同源互補(bǔ)序列的RNA為靶目標(biāo)降解特定的mRNA, RNAi的關(guān)鍵效應(yīng)分子.
shRNAs:(small hairpin RNA )小發(fā)夾RNA
是設(shè)計(jì)為能夠形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)的非編碼小RNA分子,shRNA需通過載體導(dǎo)入細(xì)胞后,然后利用細(xì)胞內(nèi)的酶切機(jī)制得到siRNA而zui終發(fā)揮RNA干擾作用.
Dicer：屬于RNaseⅢ 家族,是dsRNA的特異性核酸內(nèi)切酶
RISC：(RNA-inducing silencing complex) RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體,具有核酸內(nèi)切、外切以及解旋酶活性.
