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RACE技術服務|實驗技術服務

時間:2015/6/2閱讀:1059
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關鍵詞:RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技術服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技術服務|實驗技術服務原裝,,質(zhì)量保證,*,。
RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技術服務|實驗技術服務——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧,,承諾客戶不成功不收費,。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,,我們也會提供相應的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗,。另一方面,我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,,我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產(chǎn)品品牌:RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技術服務|實驗技術服務   http://www.,。,。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cDNA ends,RACE)是一種基于RT-PCR,,在僅知目標基因部分表達片段的基礎上,,從低豐度的轉(zhuǎn)錄本中快速擴增其cDNA的5’和3’末端的有效方法,以其簡單,、快速,、廉價等優(yōu)勢而受到越來越多的重視。RACE實驗成功的關鍵在于高質(zhì)量與完整性好的RNA以及特異性強的引物,。我們采用國內(nèi)目前應用zui廣的SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit(CLONTECH)進行cDNA的5’和3’末端片段克隆,。  zui終,,從2個有相互重疊序列的5’和3’-RACE產(chǎn)物中獲得全長cDNA;或者通過分析RACE產(chǎn)物的5’和3’端序列,,合成相應引物擴增出全長cDNA,。
與篩庫法相比較,有許多方面的優(yōu)點
1)此方法是通過PCR技術實現(xiàn)的,,無須建立cDNA文庫,,可以在很短的時間內(nèi)獲得有利用價值的信息。
2)節(jié)約了實驗所花費的經(jīng)費和時間,。
3)只要引物設計正確,,在初級產(chǎn)物的基礎上可以獲得大量的感興趣基因的全長。
實驗室現(xiàn)有的RACE試劑盒的簡介
??RACE是一種從一個相同的cDNA模板進行5‘和3‘末端快速克隆的方法,。此方法會產(chǎn)生較少的錯誤條帶,。此過程中使用的酶混合物非常適合長鏈PCR。
??使用此方法的要求是必須知道至少23-28個核苷酸序列信息,,以此來設計5’末端和3‘末端RACE反應的基因特異性引物(GSPs),。
RACE引物的設計:
基因特異性引物(GSPs)應該是:
??23-28nt
??50-70%GC
??Tm值≥65度,Tm值≥70度可以獲得好的結果
需要實驗者根據(jù)已有的基因序列設計5‘和3‘RACE反應的基因特異性引物(GSP1和GSP2).由于兩個引物的存在,,PCR的產(chǎn)物是特異性的,。
有3種驗證RACE產(chǎn)物的方法:
(1)比較由GSP和NGSP獲得RACE產(chǎn)物。
(2)Southern blot
(3)克隆并測序
??我們建議測得RACE產(chǎn)物的部分序列,。有的時候需要嵌套引物的存在,。
比較由GSP和NGSP獲得RACE產(chǎn)物。
??對于5‘末端的RACE產(chǎn)物,,比較由AP1和GSP1擴增出來的產(chǎn)物和由AP1和NGSP1擴增出來的產(chǎn)物,。
??對于3‘末端的RACE產(chǎn)物,比較由AP1和GSP2擴增出來的產(chǎn)物和由AP1和NGSP2擴增出來的產(chǎn)物,。這對于鑒定多條帶是否是上一個PCR的特異性產(chǎn)物是非常有用的。
??如果條帶是正確的,,在嵌套PCR反應中的條帶應該是略微小一些,。基本PCR和嵌套PCR產(chǎn)物的遷移率的不同取決于cDNA結構中GSP1和嵌套引物的位置,。
注意:
當循環(huán)結束時,,利用1.2%瓊脂糖凝膠電泳分析每一個管中的產(chǎn)物5μl,使用適當?shù)姆肿恿縨arker,。
?可以根據(jù)你的基因的特異性來設計的循環(huán)參數(shù),。如果看不到帶或者只有微弱的帶,在68度多加5個循環(huán),。*的延伸時間取決于擴增條帶的長度,。如果片斷的長度在2-5kb的時候,經(jīng)常使用4min,0.2-2kb的時候?qū)⒀由鞎r間減到2-3min,,對于5-10kb的條帶,,延伸時間增加到10min。

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