關(guān)鍵詞:RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界*品牌RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*。
RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi),。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí),，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn)。另一方面,，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù) http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（rapid amplification of cDNA ends,，RACE）是一種基于RT-PCR,，在僅知目標(biāo)基因部分表達(dá)片段的基礎(chǔ)上，從低豐度的轉(zhuǎn)錄本中快速擴(kuò)增其cDNA的5’和3’末端的有效方法,，以其簡(jiǎn)單,、快速、廉價(jià)等優(yōu)勢(shì)而受到越來(lái)越多的重視,。RACE實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵在于高質(zhì)量與完整性好的RNA以及特異性強(qiáng)的引物,。我們采用國(guó)內(nèi)目前應(yīng)用zui廣的SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit（CLONTECH）進(jìn)行cDNA的5’和3’末端片段克隆。 zui終,，從2個(gè)有相互重疊序列的5’和3’-RACE產(chǎn)物中獲得全長(zhǎng)cDNA,；或者通過(guò)分析RACE產(chǎn)物的5’和3’端序列，合成相應(yīng)引物擴(kuò)增出全長(zhǎng)cDNA,。
與篩庫(kù)法相比較,，有許多方面的優(yōu)點(diǎn)
1）此方法是通過(guò)PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)的，無(wú)須建立cDNA文庫(kù),，可以在很短的時(shí)間內(nèi)獲得有利用價(jià)值的信息,。
2）節(jié)約了實(shí)驗(yàn)所花費(fèi)的經(jīng)費(fèi)和時(shí)間。
3）只要引物設(shè)計(jì)正確,，在初級(jí)產(chǎn)物的基礎(chǔ)上可以獲得大量的感興趣基因的全長(zhǎng),。
實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的RACE試劑盒的簡(jiǎn)介
??RACE是一種從一個(gè)相同的cDNA模板進(jìn)行5‘和3‘末端快速克隆的方法。此方法會(huì)產(chǎn)生較少的錯(cuò)誤條帶,。此過(guò)程中使用的酶混合物非常適合長(zhǎng)鏈PCR,。
??使用此方法的要求是必須知道至少23－28個(gè)核苷酸序列信息,，以此來(lái)設(shè)計(jì)5’末端和3‘末端RACE反應(yīng)的基因特異性引物（GSPs）。
RACE引物的設(shè)計(jì)：
基因特異性引物（GSPs）應(yīng)該是：
??23－28nt
??50－70％GC
??Tm值≥65度,，Tm值≥70度可以獲得好的結(jié)果
需要實(shí)驗(yàn)者根據(jù)已有的基因序列設(shè)計(jì)5‘和3‘RACE反應(yīng)的基因特異性引物（GSP1和GSP2).由于兩個(gè)引物的存在,，PCR的產(chǎn)物是特異性的。
有3種驗(yàn)證RACE產(chǎn)物的方法：
（1）比較由GSP和NGSP獲得RACE產(chǎn)物,。
（2）Southern blot
（3）克隆并測(cè)序
??我們建議測(cè)得RACE產(chǎn)物的部分序列。有的時(shí)候需要嵌套引物的存在,。
比較由GSP和NGSP獲得RACE產(chǎn)物,。
??對(duì)于5‘末端的RACE產(chǎn)物，比較由AP1和GSP1擴(kuò)增出來(lái)的產(chǎn)物和由AP1和NGSP1擴(kuò)增出來(lái)的產(chǎn)物,。
??對(duì)于3‘末端的RACE產(chǎn)物,，比較由AP1和GSP2擴(kuò)增出來(lái)的產(chǎn)物和由AP1和NGSP2擴(kuò)增出來(lái)的產(chǎn)物。這對(duì)于鑒定多條帶是否是上一個(gè)PCR的特異性產(chǎn)物是非常有用的,。
??如果條帶是正確的,，在嵌套PCR反應(yīng)中的條帶應(yīng)該是略微小一些?；綪CR和嵌套PCR產(chǎn)物的遷移率的不同取決于ｃＤＮＡ結(jié)構(gòu)中GSP1和嵌套引物的位置,。
注意:
當(dāng)循環(huán)結(jié)束時(shí)，利用1.2%瓊脂糖凝膠電泳分析每一個(gè)管中的產(chǎn)物5μl,，使用適當(dāng)?shù)姆肿恿縨arker,。
?可以根據(jù)你的基因的特異性來(lái)設(shè)計(jì)的循環(huán)參數(shù)。如果看不到帶或者只有微弱的帶,，在68度多加5個(gè)循環(huán),。*的延伸時(shí)間取決于擴(kuò)增條帶的長(zhǎng)度。如果片斷的長(zhǎng)度在2－5kb的時(shí)候,，經(jīng)常使用4min,，0.2-2kb的時(shí)候?qū)⒀由鞎r(shí)間減到2－3min，對(duì)于5－10kb的條帶,，延伸時(shí)間增加到10min,。
