關(guān)鍵詞:MTT檢測服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌MTT檢測服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*,。
MTT檢測服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費,。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時,,我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗。另一方面,,我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,,我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒,,客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌: http://www.,。,。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>MTT為黃色化合物,是一種接受氫離子的染料,,在活細胞中作用于線粒體的呼吸鏈,,MTT在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下生成藍色的formazan結(jié)晶,formazan結(jié)晶的生成量與活細胞數(shù)目成正比,,生成的formazan結(jié)晶可溶解在DMSO中,,利用酶標儀測定570 nm處的光密度OD值,可以反映出活細胞數(shù)目和細胞活力,。死細胞中由于沒有琥珀酸脫氫酶,,因此不能還原MTT生成formazan結(jié)晶。
優(yōu)點:經(jīng)濟,、靈敏度高,,可用于大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等,。
缺點:由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的formazan結(jié)晶產(chǎn)物不溶于水,需有機溶劑溶解后才能檢測,,這不僅使工作量增加,,也會對實驗結(jié)果的準確性產(chǎn)生影響,而且有機溶劑對實驗人員也有損害,。
①將對數(shù)生長期的細胞濃度調(diào)整為1~10×104細胞/ml,,按103~104個細胞接種于96孔板,每孔100 μl,;
②培養(yǎng)細胞24小時后,,對其進行不同處理,,每個處理設(shè)三個平行對照,;
③(MTT法)適當培養(yǎng)時間后,取出細胞,,倒掉培養(yǎng)液,,每孔加入5 mg/ml新鮮配制的MTT溶液,溫育4小時,,再次倒掉上清液,,每孔加入200 ml DMSO,搖勻后,,酶標儀檢測吸光值,。
③(臺盼藍拒染法)適當培養(yǎng)時間后,,收集細胞,經(jīng)臺盼藍染色,,在倒置顯微鏡下計數(shù)藍染及不染色細胞,,計算細胞存活率,。
應(yīng)用舉例:
1.新藥篩選,;
2.細胞毒性試驗,;
3.腫瘤放射敏感性實驗,。
服務(wù)流程:
1.細胞處理,;
2.細胞計數(shù),;
3.盼蘭染色法測細胞活力,;
4.MTT法測細胞相對數(shù)和相對活力,。
注意事項
1,、選擇適當?shù)眉毎臃N濃度,。
2,、避免血清干擾:一般選小于10%的胎牛血清的培養(yǎng)液進行試驗,。在呈色后盡量吸盡孔內(nèi)殘余培養(yǎng)液。
3,、設(shè)空白對照:與試驗平行不加細胞只加培養(yǎng)液的空白對照,。其他試驗步驟保持一致,zui后比色以空白調(diào)零,。
MTT實驗吸光度zui后要在0-0.7之間,,超出這個范圍就不是直線關(guān)系,IC50是半抑制率,意思是抑制率50%的時候藥物的濃度,。把藥品稀釋成不同的濃度,,然后計算各自的抑制率,以藥品的濃度為橫坐標,,抑制率為縱坐標作圖,然后得到50%抑制率時候的藥品濃度,,就是IC50,。要點:藥品2倍稀釋,多做梯度.