關(guān)鍵詞:CCK-8細(xì)胞增殖檢測服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡介：世界*品牌CCK-8細(xì)胞增殖檢測服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*。
CCK-8細(xì)胞增殖檢測|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi)。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時(shí),，我們也會(huì)提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費(fèi)精力重復(fù)實(shí)驗(yàn),。另一方面，我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：CCK-8細(xì)胞增殖檢測服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù) http://www.,。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒?yàn)流程：
Cell Counting Kit簡稱CCK8試劑盒，是一種基于WST-8（化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒,。
WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品,，工作原理為：在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物（formazan）,。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比,，與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長處測定OD值,，間接反映活細(xì)胞數(shù)量,。
CCK8法應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選,、細(xì)胞增殖測定,、細(xì)胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測等。
酚紅和血清對(duì)CCK8法的檢測不會(huì)造成干擾,；
細(xì)胞毒性非常低,，因此加入WST-8顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)從而找到*測定時(shí)間,。關(guān)于不同細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測試劑盒的比較和選擇關(guān)于不同細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測試劑盒的比較和選擇,，請參考CCK8法的操作步驟
實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測
1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）,。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）,。
2、向每孔加入10 μL CCK8溶液（注意不要在孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。
4,、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。
5,、若暫時(shí)不測定OD值,，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下,。24小時(shí)內(nèi)測定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞增殖-毒性檢測
1,、在96孔板中配置100μL的細(xì)胞懸液,。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（37℃，5% CO2）,。
2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì),。
3,、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12,、24或48小時(shí)）,。
4、向每孔加入10μL CCK8溶液（注意不要再孔中生成氣泡,，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）,。
5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí),。
6,、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。
7、若暫時(shí)不測定OD值,，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。24小時(shí)內(nèi)測定,，吸光度不會(huì)發(fā)生變化,。
注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基,，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響,。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下,，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可,。
活力計(jì)算：
細(xì)胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）] ×100
A（加藥）：具有細(xì)胞,、CCK8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK8溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度
A（0加藥）：具有細(xì)胞、CCK8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
*細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力
保存條件：
4℃避光保存一年有效,，-20℃避光保存兩年有效,。
