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核酸提取與純化技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)

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關(guān)鍵詞:核酸提取與純化技術(shù)服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>1.核酸的提取
核酸都溶于水,,而不溶于有機溶劑,利用此性質(zhì)進行提取,。在細胞內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成脫氧核糖核蛋白(DNP),,RNA與蛋白質(zhì)結(jié)合成核糖核蛋白(RNP),,在不同濃度的鹽溶液中它們的溶解度差別很大,DNP在純水或1 mol/LNaCl溶液中溶解度較大,,但在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度很低,,相反,RNP易溶解,。因此,,用0.14mol/LNaCl溶液可簡單地初步分開DNP和RNP。
在分離核酸中zui困難的是將核酸與緊密結(jié)合的蛋白質(zhì)分開,,而且還要避免核酸的降解,。常用的解離劑是陰離子去垢劑,如脫氧膽酸鈉,,十二烷基硫酸鈉(SDS),,4-氨基水楊酸鈉和萘-1,5-二磺酸鈉等,,它們具有溶解病毒,、細菌的作用,可使核酸從蛋白質(zhì)上游離出來,,還具有抑制核糖核酸酶的作用,。另外除去核酸中的蛋白質(zhì)的一個有效辦法是用酚-氯仿混合液,它們可使蛋白質(zhì)變性,,并對核糖核酸酶有抑制作用,,另外氯仿比重大可使有機相和水相*分開,減少殘留在水相中的酚,。在用酚-氯仿抽提核酸提取液時,,還須要劇烈振搖,為防止起泡和促使水相與有機相的分離,,在酚-氯仿抽提液中再加上一定量的異戊醇,。
2. 核酸的純化
核酸的純化zui關(guān)鍵步驟是去除蛋白質(zhì),通常只要用酚/氯仿,、氯仿抽提核酸的水溶液即可,。每當需要把DNA克隆操作的某一步所用的酶滅活或去除以便進行下一步時,可進行這種抽提,。然而,,如果從細胞裂解液等復(fù)雜的分子混合物中純化核酸,則要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白質(zhì)后,,再用有機溶劑抽提,。這些廣譜的蛋白酶包括鏈霉蛋白酶及蛋白酶K等,它們對多數(shù)天然蛋白質(zhì)均有活性,。
用酚/氯仿抽提:這兩種有機溶劑合用,,比單獨用酚抽提除蛋白效果更佳,。繼而用氯仿抽提則可除去核酸制品中的痕量酚。具體步驟如下:
①核酸樣品置有蓋小離心管中,,加入等體積的酚/氯仿,;②旋渦混勻管內(nèi)容物,使呈乳狀,;③12000g室溫離心15s,;④水相移入另一離心管,棄去兩相界面和有機相,;⑤重復(fù)步驟①~④,,直至兩相界面上無蛋白質(zhì)為止;⑥加入等體積的氯仿并重復(fù)②~④步操作,;⑦按下述核酸濃縮法沉淀回收核酸,。
3.核酸的濃縮
應(yīng)用zui廣的核酸濃縮法是乙醇沉淀法。在中等濃度單價陽離子存在下,,加入一定量的乙醇后,,所形成的核酸沉淀可經(jīng)離心而回收。甚至對低至pg(皮克)量的DNA或RNA,,也可定量回收,?;厥盏暮怂峥砂此铦舛?,再溶于適當?shù)木彌_液中。具體操作時,,可向含樣品的小離心管中加入單價陽離子鹽貯存液,。單價陽離子鹽的選擇,主要基于下述考慮:用醋酸銨可減少dNTP的共沉淀,,但在以后要作核酸的磷酸化時應(yīng)避免用醋酸銨,,因銨離子是多核苷酸激酶的強烈抑制劑。當用較高濃度的乙醇沉淀RNA時,,常用LiCl,,因LiCl在乙醇中溶解度很高,不隨核酸共沉淀,。含有SDS的核酸樣品,,應(yīng)使用NaCl,這時該去垢劑在70%乙醇中仍保持可溶,。
DNA和RNA的沉淀,,大多使用醋酸鈉(pH5.2)。
產(chǎn)品組成:
集液管
核酸純化柱的集液管由醫(yī)療級的聚丙烯制成,,容量為2ml和50ml,。
Column
核酸純化柱的column由醫(yī)療級的聚丙烯制成,,底部為網(wǎng)狀或帶接口,容量約為1ml或25ml,。
墊片
核酸純化柱的墊片為特殊纖維材料,,耐受酸堿和大部分的有機溶劑,對大部分的生物分子不會產(chǎn)生吸附,。
濾膜
經(jīng)過特別優(yōu)化的進口原料的硅膠膜或者玻璃纖維膜,,zui大程度的吸附核酸分子。
服務(wù)說明
?細菌,、細胞樣品需新鮮培養(yǎng),;動物組織、植物組織等樣品取樣后需液氮或-80℃速凍,;
?用于提取基因組DNA的血液樣品在4℃下可保存一周,,-20℃下可保存1個月;
產(chǎn)品用途:
1. 適用于動物組織DNA/RNA提?。捍竽X,、心臟、肺,、胃,、肝臟、胸腺,、腎臟,、腸、淋巴結(jié),、肌肉,、骨骼等;
2.適用于植物組織DNA/RNA提?。喝~子,、花、根,、種子等,;
3.適用于真菌、細菌等樣本DNA/RNA提??;
4.適用于法醫(yī)樣本DNA/RNA提取:煙頭,,糞便,,口腔拭子,尿液,毛發(fā),,血漬,,精液等;
5.適用于體液DNA/RNA提?。貉?、血漿、尿液,、腦脊液,、唾液、黏膜分泌液等,;
6.適用于培養(yǎng)細胞DNA/RNA提?。篐eLa、NIH/3T3,、cos-7細胞等,;
7.適用于全血、白細胞層等樣本DNA/RNA提??;

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