關(guān)鍵詞:分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界*品牌分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝,，質(zhì)量保證,*。
分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建技術(shù)服務(wù)|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧,，承諾客戶不成功不收費(fèi)。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒,，客戶可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌： http://www.。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
分子克隆的相關(guān)載體：DNA片段的克隆需要合適的載體,，載體或是質(zhì)粒，或是噬菌體,，或是病毒,，通常大多經(jīng)過(guò)人工改造。作為載體必須具備兩條件：一是該載體在細(xì)胞內(nèi)必須能自主復(fù)制,，即必須具備復(fù)制原點(diǎn),；二是該載體必須具備適合的酶切位點(diǎn)，且這些酶切位點(diǎn)不在復(fù)制原點(diǎn)區(qū)域內(nèi),。以上兩條,，保證了載體的可繁殖性和可利用性。為了便于獲得陽(yáng)隆克隆,，載體上常有篩選標(biāo)記,，如對(duì)抗菌素的抗性，某些基因產(chǎn)物的顯色反應(yīng)等,。
服務(wù)要求：
1,、請(qǐng)以等形式告知我們服務(wù)的主要目的及具體要求。
2,、提供外源DNA的來(lái)源及背景資料,。DNA來(lái)源包括：PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；RT－PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,；從其它質(zhì)粒上酶切得到的DNA片段等,。
3、提供DNA片段的電泳照片,，并請(qǐng)標(biāo)明Marker有濃度,。
4、提供載體來(lái)源與背景資料,。
5,、注明克隆使用的酶切位點(diǎn)以及是否需要平端連接等。
相關(guān)材料說(shuō)明：
1,、對(duì)于實(shí)驗(yàn)材料中涉及病原體等危險(xiǎn)材料不接受,。
2、實(shí)驗(yàn)中涉及的堿基序列請(qǐng)以的形式發(fā)到我中心,。
3,、實(shí)驗(yàn)中的使用載體要盡量提供背景資料：（質(zhì)粒大小，抗性,，拷貝數(shù),，多克隆位點(diǎn)等）如果是商品化載體,，請(qǐng)您提供生產(chǎn)廠家及標(biāo)準(zhǔn)名稱；如果所提供載體是您自己構(gòu)建的請(qǐng)注明大體結(jié)構(gòu)情況,。
4,、我中心可以提供常用的如（氨芐青霉素，氯霉素,，卡那霉素）以外的抗生素需您提供,。
5、您自己提供的引物如果為干品,，請(qǐng)您標(biāo)注具體的OD數(shù),，如果是液體態(tài)，請(qǐng)您標(biāo)明濃度,。
6,、可以用甘油菌和穿刺菌形式郵寄菌體。（同時(shí)提供相應(yīng)的質(zhì)粒）,；如果提供質(zhì)粒,，則質(zhì)粒的量在4ug以上；如果提供的是PCR產(chǎn)物,，則PCR產(chǎn)物量在5u以上（附上電泳圖）
7,、用于提取RNA/DNA的材料要新鮮。采樣時(shí)應(yīng)首先在液氮中速凍,，保存在－80度的冰箱中，使用干冰運(yùn)輸,。
載體DNA的選擇
分子克隆載體
①質(zhì)粒:質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外遺傳因子,，DNA呈環(huán)狀，大小為1-200千堿基對(duì)(kb),。在細(xì)胞中以游離超螺旋狀存在,，很容易制備。質(zhì)粒DNA可通過(guò)轉(zhuǎn)化引入寄主菌,。在細(xì)胞中有兩種狀態(tài),，一是"緊密型";二是"松弛型"。此外還應(yīng)具有分子量小,，易轉(zhuǎn)化,，有一至多個(gè)選擇標(biāo)記的特點(diǎn)。質(zhì)粒型載體一般只能攜帶10kb以下的DNA片段,，適用于構(gòu)建原核生物基因文庫(kù),，cDNA庫(kù)和次級(jí)克隆。
②噬菌體DNA:常用的λ噬菌體的DNA是雙鏈,，長(zhǎng)約49kb,，約含50個(gè)基因,，其中50%的基因?qū)κ删w的生長(zhǎng)和裂解寄主菌是必需的，分布在噬菌體DNA兩端,。中間是非必需區(qū),，進(jìn)行改造后組建一系列具有不同特點(diǎn)的載體分子。λ載體系統(tǒng)zui適用于構(gòu)建真核生物基因文庫(kù)和cDNA庫(kù),。
M13噬菌體是一種*的載體系統(tǒng),，它只能侵襲具有F基因的大腸桿菌，但不裂解寄主菌,。M13DNA(RF)在寄主菌內(nèi)是雙鏈環(huán)狀分子,，象質(zhì)粒一樣自主復(fù)制，制備方法同質(zhì)粒,。寄主菌可分泌含單鏈DNA的M13噬菌體,，又能方便地制備單鏈DNA，用于DNA順序分析,、定點(diǎn)突變和核酸雜交,。
③柯斯(Cos)質(zhì)粒:是一類帶有噬菌體DNA粘性末端順序的質(zhì)粒DNA分子。是噬菌體-質(zhì)?；旌衔?。此類載體分子容量大，可攜帶45kb的外源DNA片段,。也能象一般質(zhì)粒一樣攜帶小片段DNA,，直接轉(zhuǎn)化寄主菌。這類載體常被用來(lái)構(gòu)建高等生物基因文庫(kù),。
