小鼠胱天蛋白酶9（Caspase-9）ELISA試劑盒
小鼠胱天蛋白酶9（Caspase-9）ELISA試劑盒說明書
小鼠胱天蛋白酶9（Caspase-9）ELISA試劑盒僅供研究使用
預期應用:ELISA法定量測定小鼠血漿,、細胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體中Caspase-9含量。
實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中Caspase-9水平,。用純化的抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Caspase-9抗原,、生物素化的抗小鼠Caspase-9抗體,、HRP標記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的Caspase-9呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，計算樣品濃度,。
特異性:本試劑盒可同時檢測重組或天然的小鼠Caspase-9，且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應,。
組成:
1. 酶聯(lián)板：一塊（96孔）
2. 標準品（凍干品）：2瓶,，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，其濃度為1000 pg/mL,，做系列倍比稀釋后,，分別稀釋成1000 pg/mL，500 pg/mL ,，250 pg/mL,，125 pg/mL，62.5 pg/mL,，31.2 pg/mL,，15.6 pg/mL，其原液直接作為zui高標準濃度,，樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pg/mL,，臨用前15分鐘內(nèi)配制。
3. 樣品稀釋液：1×20ml/瓶,。
4. 檢測稀釋液A：1×10ml/瓶。
5. 檢測稀釋液B：1×10ml/瓶,。
6. 檢測溶液A：1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測稀釋液A1：100稀釋,。
7. 檢測溶液B：1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測稀釋液B1：100稀釋。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶,。
9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶,，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）,。
標本的采集及保存 :
1.血漿：用32％枸櫞酸鈉1：9（如：0.5mL 32％枸櫞酸鈉+4.5mL全血）抗凝,，血液和抗凝劑須充分混均，使枸櫞酸鈉終濃度為3.2%,。血漿標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,，或?qū)吮痉庞?20℃保存，但應避免反復凍融,。
2.細胞培養(yǎng)物上清：請離心后收集上清,，并將標本保存于-20℃，且應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,，因此溶血標本不宜進行此項檢測,。
操作步驟:
各試劑在使用前平衡至室溫。
1. 加樣：分別設空白孔,、標準孔,、待測樣品孔。除空白孔外,，余孔分別加標準溶液或待測樣品100ul,，輕輕混勻，37℃,，120分鐘,。
2. 棄去液體，甩干,，不用洗滌,。
3. 每孔加檢測溶液A工作液 100ul，37℃,60分鐘,。洗板3次,，350ul/每孔，甩干,。
4. 每孔加檢測溶液B工作液 100ul,，37℃，60分鐘,，洗板5次,，甩干。
5. 依序每孔加底物溶液90ul,，37℃避光顯色30分鐘,。
6. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應,。用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）,。
注：
1.每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑,，只是zui后加底物溶液及2NH2SO4,。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
2.為防止樣品蒸發(fā),，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),。
洗板方法:
1.自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。
2.手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘,，根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次,。
計算: 以標準物的濃度為橫坐標（對數(shù)坐標）,，OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
注意事項:
1． 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性,。
2． 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
3． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔。
4． 如標本中待測物質(zhì)含量過高,，請先稀釋后再測定,，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
5．在配制標準品,、檢測溶液工作液時,，請以相應的稀釋液配制，不能混淆,。
6．底物請避光保存。
說明
1.在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中,。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染,，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果,。
2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度,。請注意在吸取標本 / 標準品，酶結(jié)合物或底物時,，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,，將會導致不同的 “預孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。而且,，洗滌不充分將影響試驗結(jié)果,。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃,，具體以標簽上的標示為準,。
4. 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),，此為正常現(xiàn)象,，不會對實驗結(jié)果造成任何影響,。
6. 中、英文說明書可能會有不一致之處,，請以英文說明書為準,。
7. 所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。
8. 有效期：6個月
