小鼠胱天蛋白酶9（Caspase-9）ELISA試劑盒
小鼠胱天蛋白酶9（Caspase-9）ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
小鼠胱天蛋白酶9（Caspase-9）ELISA試劑盒僅供研究使用
預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測(cè)定小鼠血漿、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體中Caspase-9含量,。
實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定標(biāo)本中Caspase-9水平,。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Caspase-9抗原,、生物素化的抗小鼠Caspase-9抗體、HRP標(biāo)記的親和素,，經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的Caspase-9呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度,。
特異性:本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的小鼠Caspase-9,，且與其它相關(guān)蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。
組成:
1. 酶聯(lián)板：一塊（96孔）
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶,，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,，其濃度為1000 pg/mL，做系列倍比稀釋后,，分別稀釋成1000 pg/mL,，500 pg/mL ，250 pg/mL,，125 pg/mL,，62.5 pg/mL，31.2 pg/mL,，15.6 pg/mL,，其原液直接作為zui高標(biāo)準(zhǔn)濃度，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/mL,，臨用前15分鐘內(nèi)配制,。
3. 樣品稀釋液：1×20ml/瓶,。
4. 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml/瓶,。
5. 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml/瓶。
6. 檢測(cè)溶液A：1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測(cè)稀釋液A1：100稀釋,。
7. 檢測(cè)溶液B：1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測(cè)稀釋液B1：100稀釋,。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶,，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍,。
10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
標(biāo)本的采集及保存 :
1.血漿：用32％枸櫞酸鈉1：9（如：0.5mL 32％枸櫞酸鈉+4.5mL全血）抗凝,，血液和抗凝劑須充分混均,，使枸櫞酸鈉終濃度為3.2%。血漿標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2.細(xì)胞培養(yǎng)物上清：請(qǐng)離心后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20℃,，且應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè),。
操作步驟:
各試劑在使用前平衡至室溫,。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。除空白孔外，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測(cè)樣品100ul,，輕輕混勻,，37℃，120分鐘,。
2. 棄去液體,，甩干，不用洗滌,。
3. 每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100ul,，37℃,60分鐘。洗板3次,，350ul/每孔,，甩干。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液 100ul,，37℃,，60分鐘，洗板5次,，甩干,。
5. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色30分鐘,。
6. 依序每孔加終止溶液50ul,，終止反應(yīng)。用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）,。
注：
1.每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔,，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2NH2SO4,。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零,。
2.為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)。
洗板方法:
1.自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī),，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,。
2.手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,；將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘,，根據(jù)需要,，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
計(jì)算: 以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)）,，OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)）,，在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度,。
注意事項(xiàng):
1． 洗滌過(guò)程非常重要,，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。
2． 一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
3． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。
4． 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù),。
5．在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí),，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆,。
6．底物請(qǐng)避光保存,。
說(shuō)明
1.在儲(chǔ)存及孵育過(guò)程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染,，試劑避免受到微生物的污染,，因?yàn)榈鞍姿饷傅母蓴_將導(dǎo)致出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。
2. 小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度,。請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,，酶結(jié)合物或底物時(shí),，*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時(shí)間,，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。而且，洗滌不充分將影響試驗(yàn)結(jié)果,。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃,，部分試劑保存于2-8℃，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn),。
4. 濃洗滌液會(huì)有鹽析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。
5. 剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì),，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響,。
6. 中,、英文說(shuō)明書(shū)可能會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn),。
7. 所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
8. 有效期：6個(gè)月
