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人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒

時間:2011/12/30閱讀:810
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 人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒

人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書
人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理,,來檢測人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF),,只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷,。
檢測范圍:0.5μg/L→15μg/L
規(guī)格:96T/盒
用途:用于人組織及相關(guān)液體樣本中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的測定,。
工作原理
本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定樣品中人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的水平。向預(yù)先包被了人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF),溫育,;洗滌后,,加入HRP標(biāo)記過的腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)抗體。再經(jīng)過溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶,,然后加入底物A、B,,產(chǎn)生藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的濃度呈正相關(guān),。
組成 
1 標(biāo)準(zhǔn)品(24μg/L) 0.5ml 7 顯色劑A液 6ml
2 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 3ml 8 顯色劑B液 6ml
3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 終止液 6ml
4 酶標(biāo)試劑 6ml 10 說明書 1份
5 30倍濃縮洗滌液 20ml 11 封板膜 2張
6 樣品稀釋液 6ml 12 密封袋 1個
需要而未提供的試劑和器材
1.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2.7℃恒溫箱
3.一次性試管
4.吸水紙
5.精密移液器及一次性吸頭
6.蒸餾水
注意事項(xiàng):
從2-8℃取出的試劑盒,,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,,以避免試驗(yàn)誤差,。建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再按說明書操作進(jìn)行測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。為避免交叉污染,,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜,。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下,。
洗板方法
1.自動洗板:如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中,。
2.手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,;在實(shí)驗(yàn)臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),,浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,,重復(fù)此過程數(shù)次,。
標(biāo)本要求 
1.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作程序
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,,用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋):
2.12μg/L (5號標(biāo)準(zhǔn)品) 120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3.6μg/L (4號標(biāo)準(zhǔn)品) 120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
4.3μg/L (3號標(biāo)準(zhǔn)品) 120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5.1.5μg/L (2號標(biāo)準(zhǔn)品) 120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6.0.75μg/L (1號標(biāo)準(zhǔn)品) 120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
7.分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品50μl;在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。輕輕晃動混勻,37℃溫育30分鐘,。 
8.棄去液體,,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。如此重復(fù)5次,,拍干。
9.每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。輕輕晃動混勻,37℃溫育30分鐘,。 
10.棄去液體,,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。如此重復(fù)5次,,拍干。
11.每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色10分鐘。
12.取出酶標(biāo)板,,每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
測定:以空白孔調(diào)零,,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,,其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù),。
操作程序總結(jié):
1.準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
2.加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,,37℃反應(yīng)30分鐘
3.洗板5次,,加入酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)30分鐘
4.洗板5次,,加入顯色液A,、B,37℃顯色10分鐘
5.加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值,計算
保存:2-8℃ 
有效期:6個月,。

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