人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒
人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書
人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理,，來檢測人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）,，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷,。
檢測范圍：0.5μg/L→15μg/L
規(guī)格：96T/盒
用途：用于人組織及相關(guān)液體樣本中腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的測定。
工作原理
本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的水平,。向預(yù)先包被了人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）,，溫育；洗滌后,，加入HRP標(biāo)記過的腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）抗體,。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶,，然后加入底物A,、B，產(chǎn)生藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺與樣品中人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的濃度呈正相關(guān)。
組成
1 標(biāo)準(zhǔn)品（24μg/L） 0.5ml 7 顯色劑A液 6ml
2 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 3ml 8 顯色劑B液 6ml
3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 終止液 6ml
4 酶標(biāo)試劑 6ml 10 說明書 1份
5 30倍濃縮洗滌液 20ml 11 封板膜 2張
6 樣品稀釋液 6ml 12 密封袋 1個(gè)
需要而未提供的試劑和器材
1.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2.7℃恒溫箱
3.一次性試管
4.吸水紙
5.精密移液器及一次性吸頭
6.蒸餾水
注意事項(xiàng):
從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘,。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差。建議所有標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本都做雙份檢測,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再按說明書操作進(jìn)行測定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。為避免交叉污染,，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。底物B對(duì)光敏感,，避免長時(shí)間暴露于光下,。
洗板方法
1.自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中,。
2.手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,，重復(fù)此過程數(shù)次,。
標(biāo)本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
操作程序
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶請(qǐng)按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：
2.12μg/L （5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3.6μg/L （4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
4.3μg/L （3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5.1.5μg/L （2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6.0.75μg/L （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 120μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
7.分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品50μl；在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。輕輕晃動(dòng)混勻，37℃溫育30分鐘,。
8.棄去液體,，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。如此重復(fù)5次,，拍干。
9.每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。輕輕晃動(dòng)混勻，37℃溫育30分鐘,。
10.棄去液體,，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。如此重復(fù)5次,，拍干。
11.每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘,。
12.取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算,。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,，其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。
操作程序總結(jié)：
1.準(zhǔn)備試劑,，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
2.加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,，37℃反應(yīng)30分鐘
3.洗板5次，加入酶標(biāo)試劑,，37℃反應(yīng)30分鐘
4.洗板5次,，加入顯色液A、B,，37℃顯色10分鐘
5.加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值,計(jì)算
保存:2-8℃
有效期:6個(gè)月,。
