人纖連蛋白（FN）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）
人纖連蛋白（FN）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）使用說(shuō)明書(shū)
檢測(cè)范圍:0.78-50ng/ml
規(guī)格:96T/盒
人纖連蛋白（FN）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）用途:定量檢測(cè)人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中纖連蛋白（FN）的含量,。
檢測(cè)原理:本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標(biāo)準(zhǔn)品,、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被人纖連蛋白（FN） 多克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,，溫育足夠時(shí)間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分,，再加入酶標(biāo)工作液，溫育足夠時(shí)間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分,。依次加入底物A、B,，底物（TMB）在辣根過(guò)氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中人纖連蛋白（FN） 濃度呈正相關(guān),，450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值，計(jì)算樣本中人纖連蛋白（FN） 含量,。
組成：
1 酶標(biāo)包被板12 孔×8 條7 底物夜A 6mL
2 標(biāo)準(zhǔn)品：50ng/ml 0.6mL 8 底物夜B 6mL
3 20 倍濃縮洗滌液20mL 9 終止液6mL
4 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液6mL 10 說(shuō)明書(shū)1 份
5 樣本稀釋液6mL 11 封板膜1 張
6 酶標(biāo)試劑6mL 12 密封袋1 個(gè)
備注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：50,、25、12.5,、6.25,、3.12、1.56ng/ml
需要而未提供的試劑和器材：
1、37℃恒溫箱
2,、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
3,、精密移液器及一次性吸頭
4、蒸餾水
5,、一次性試管
6,、吸水紙
操作步驟：
1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。
3,、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上,，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置,，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對(duì)照孔不加,。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
5,、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4 次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板）,。
6,、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對(duì)照孔不加,。
7,、溫育：重復(fù)4 的操作。
8,、洗板：重復(fù)5 的操作,。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B 液50μL,，37℃避光顯色15min,。
10、終止：取出酶標(biāo)板,，每孔加終止液50μL,，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11,、測(cè)定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值（OD值）,。
12,、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算,。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù),。
樣本要求：
1、樣本應(yīng)充分離心,，不得有溶血及顆粒,。
2、樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,，因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的抑制劑,。
3、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)：
1,、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
2,、酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3,、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè)，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差,。
4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5 倍，計(jì)算結(jié)果乘以5 才是樣本實(shí)際濃度,。
5,、本試劑盒定量范圍為0.78-50ng/ml，超過(guò)此范圍,，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得,，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果，請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果（0.78-50ng/ml范圍內(nèi)）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。
6、若顯色過(guò)淺,，可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間,。
7、為避免交叉污染,，標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣，不得碰到微孔,；不得重復(fù)使用封板膜,。
8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號(hào)的試劑不得混用,。
9、底物B 對(duì)光敏感,，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。
操作程序總結(jié):準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品,，37℃反應(yīng)30分鐘洗板4次,，加入酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)30分鐘洗板4次,，加入顯色液A、B,，37℃顯色15分鐘加入終止液15分鐘之內(nèi)讀OD值計(jì)算,。
貯藏:2-8℃，避光防潮保存。
有效期:6個(gè)月
