人纖連蛋白（FN）定量檢測試劑盒（ELISA）
人纖連蛋白（FN）定量檢測試劑盒（ELISA）使用說明書
檢測范圍:0.78-50ng/ml
規(guī)格:96T/盒
人纖連蛋白（FN）定量檢測試劑盒（ELISA）用途:定量檢測人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中纖連蛋白（FN）的含量,。
檢測原理:本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標準品、待測樣本加入到預(yù)先包被人纖連蛋白（FN） 多克隆抗體透明酶標包被板中,，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標工作液,，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A,、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中人纖連蛋白（FN） 濃度呈正相關(guān),，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標準品和樣品的OD值,，計算樣本中人纖連蛋白（FN） 含量,。
組成：
1 酶標包被板12 孔×8 條7 底物夜A 6mL
2 標準品：50ng/ml 0.6mL 8 底物夜B 6mL
3 20 倍濃縮洗滌液20mL 9 終止液6mL
4 標準品稀釋液6mL 10 說明書1 份
5 樣本稀釋液6mL 11 封板膜1 張
6 酶標試劑6mL 12 密封袋1 個
備注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：50、25,、12.5,、6.25、3.12,、1.56ng/ml
需要而未提供的試劑和器材：
1,、37℃恒溫箱
2、標準規(guī)格酶標儀
3,、精密移液器及一次性吸頭
4,、蒸餾水
5、一次性試管
6,、吸水紙
操作步驟：
1,、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。
2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3,、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板,，固定于框架上,，分別設(shè)置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置,，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加。
4,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
5、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4 次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。
6,、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加,。
7,、溫育：重復(fù)4 的操作。
8,、洗板：重復(fù)5 的操作,。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B 液50μL,，37℃避光顯色15min。
10,、終止：取出酶標板,，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11,、測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi),，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12,、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值,，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度,，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
樣本要求：
1,、樣本應(yīng)充分離心,，不得有溶血及顆粒。
2,、樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,，因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
3,、標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能立即試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注意事項：
1,、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。
2,、酶標包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。
3,、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值,，以減小實驗誤差。
4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5 倍,，計算結(jié)果乘以5 才是樣本實際濃度。
5,、本試劑盒定量范圍為0.78-50ng/ml,，超過此范圍，為標準曲線延伸計算所得,，不做為準確定量結(jié)果,，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果（0.78-50ng/ml范圍內(nèi)），乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
6,、若顯色過淺,，可適當延長底物溫育時間。
7,、為避免交叉污染,，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,；酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣,，不得碰到微孔,；不得重復(fù)使用封板膜。
8,、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號的試劑不得混用。
9,、底物B 對光敏感,，避免長時間暴露于光下。
操作程序總結(jié):準備試劑,，樣品和標準品加入準備好的樣品和標準品,，37℃反應(yīng)30分鐘洗板4次，加入酶標試劑,，37℃反應(yīng)30分鐘洗板4次,，加入顯色液A、B,，37℃顯色15分鐘加入終止液15分鐘之內(nèi)讀OD值計算,。
貯藏:2-8℃，避光防潮保存,。
有效期:6個月
