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elisa試驗中關(guān)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品裂解的方法

時間:2011/12/23閱讀:656
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 elisa試驗中關(guān)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品裂解的方法

對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品:
1.融解RIPA裂解液,,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,,使PMSF的zui終濃度為1mM,。
2.對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下,,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后,,細(xì)胞就會被裂解,。
對于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散,。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液,。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀,。如果細(xì)胞量較多,,必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管,然后再裂解,。
3.充分裂解后,,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE,、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說明:通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠,,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升,。

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