人胰島素（Insulin）說(shuō)明書(shū)
人胰島素（Insulin）酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測(cè)范圍：96T 0.5mU/L – 16mU/L
使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中胰島素（Insulin）含量。
實(shí)驗(yàn)原理 :本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人胰島素（Insulin）水平,。用純化的人胰島素（Insulin）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入胰島素（Insulin）,，再與 HRP 標(biāo)記的胰島素（Insulin）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素（Insulin）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人胰島素（Insulin）濃度。
試劑盒組成:
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（32mU/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
標(biāo)本要求:
1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性,。
2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟:
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。
16mU/L 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
8.0mU/L 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
4.0mU/L 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.0mU/L 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.0mU/L 1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同） 、標(biāo)準(zhǔn)孔,、
待測(cè)樣品孔,。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,， 待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5,。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色） 。
11.測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,， 計(jì)算出樣品濃度,， 再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度,。
注意事項(xiàng):
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值） ，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） ,。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6.底物請(qǐng)避光保存,。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10.如與英文說(shuō)明書(shū)有異,，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn),。
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存：2-8℃。
2.有效期：6個(gè)月
