人抗核抗體（ANA）Elisa試劑盒說明書
人抗核抗體（ANA）Elisa試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍:96T 2ng/L - 120ng/L
使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中抗核抗體（ANA）含量,。
實驗原理:本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人抗核抗體（ANA）水平,。用純化的抗原包被微孔板,，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入抗核抗體（ANA）,，再與HRP 標記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,，經過*洗滌后加底物TMB 顯色,。TMB 在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗核抗體（ANA）呈正相關,。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中人抗核抗體（ANA）濃度,。
人抗核抗體（ANA）Elisa試劑盒組成:
1.30倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2.酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（160ng/L） 0.5ml×1 瓶
3.酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4.樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5.顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6.顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本要求:
1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟:
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
80ng/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
40ng/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
20ng/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
10ng/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
5ng/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2.加樣:分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干,。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
7.溫育:操作同3,。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
11.測定:以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。
操作程序總結：
計算,以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。
3.各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6.底物請避光保存,。
7.嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用,。
10.如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6個月
