人輪狀病毒抗體（RV Ab）ELISA試劑盒只能用于科學(xué)研究,，不得用于醫(yī)學(xué)診斷
人輪狀病毒抗體（RV Ab）ELISA試劑盒使用說明書
檢測原理:試劑盒采用雙抗原一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被人輪狀病毒抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、HRP標(biāo)記的檢測抗原,，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中人輪狀病毒抗體（RVAb）的存在與否,。
樣品收集、處理及保存方法:
1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2.血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。
3.細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清,。
5.保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測,，請按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品:
1.37℃恒溫箱
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL
3.酶標(biāo)儀（450nm）
操作注意事項(xiàng):
1.試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存,。
3.預(yù)處理后的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋以達(dá)到試劑盒的的*檢測效果。
4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液量及順序進(jìn)行溫育操作,。
5.所有液體組分使用前充分搖勻。
人輪狀病毒抗體（RV Ab）ELISA試劑盒組成:
1.名稱96孔配置48孔配置備注
2.微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無
3.陰性對(duì)照0.5mL 0.5mL 無
4.陽性對(duì)照0.5mL 0.5mL 無
5.檢測抗原-HRP 10mL 5mL 無
6.20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋
7.樣本稀釋液6mL 3mL 無
8.底物A 6mL 3mL 無
9.底物B 6mL 3mL 無
10.終止液6mL 3mL 無
11.封板膜2 張2 張無
12.說明書1 份1 份無
13.自封袋1 個(gè)1 個(gè)無
試劑的準(zhǔn)備:20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。
洗板方法:
1.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次,。
2.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次。
操作步驟:
1.從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置陰、陽性對(duì)照孔和樣本孔,，陰,、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照各50μL,；
3.待測樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL；
4.隨后陰,、陽性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗原100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,，15min 內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。
結(jié)果判斷:
1.試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00,；陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15,。
2.臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
3.陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性
4.陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off）,，樣品為陽性
試劑盒性能:
1.準(zhǔn)確性：陽性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00,；陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15，說明試驗(yàn)結(jié)果有效。
2.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。
3.重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%。
4.貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。
5.有效期：6個(gè)月
