人視黃醇結合蛋白4（RBP-4）Elisa試劑盒說明書
人視黃醇結合蛋白4（RBP-4）Elisa試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍:96T 1μg/L -40μg/L
實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人視黃醇結合蛋白4（RBP-4）水平,。用純化的人視黃醇結合蛋白4（RBP-4）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入視黃醇結合蛋白4（RBP-4）,，再與HRP 標記的視黃醇結合蛋白4（RBP-4）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的視黃醇結合蛋白4（RBP-4）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中人視黃醇結合蛋白4（RBP-4）濃度,。
使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中視黃醇結合蛋白4（RBP-4）含量,。
人視黃醇結合蛋白4（RBP-4）Elisa試劑盒組成:
1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品（80μg/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
標本要求:
1.不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2.標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
操作步驟:
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
40μg/L 5 號標準品150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液
20μg/L 4 號標準品150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
10μg/L 3 號標準品150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
5μg/L 2 號標準品150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2.5μg/L 1 號標準品150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外。
7.溫育：操作同3,。
8.洗滌：操作同5,。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘。
10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。
11.測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。
操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果,。
3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5.封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6.底物請避光保存,。
7.嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號組分不得混用,。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存：2-8℃,。
2.有效期：6個月
