本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍:96T 0.5ng/ml - 12ng/ml
使用目的:本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中激肽釋放酶Ⅱ（HK-Ⅱ）含量,。
實驗原理:人激肽釋放酶Ⅱ（HK-Ⅱ）Elisa試劑盒說明書本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人激肽釋放酶Ⅱ（HK-Ⅱ）水平,。用純化的人激肽釋放酶Ⅱ（HK-Ⅱ）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入激肽釋放酶Ⅱ（HK-Ⅱ），再與HRP 標(biāo)記的激肽釋放酶Ⅱ（HK-Ⅱ）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的激肽釋放酶Ⅱ（HK-Ⅱ）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人激肽釋放酶Ⅱ（HK-Ⅱ）濃度,。
試劑盒組成:
1.顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個;
2.酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶;
3.樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份;
4.酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（24ng/ml） 0.5ml×1 瓶;
5.30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶;
6.顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張;
標(biāo)本要求:
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。
12ng/ml 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;
6.0ng/ml 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;
3.0ng/ml 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;
1.5ng/ml 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;
0.75ng/ml 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液;
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5 次,，拍干,。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。
7.溫育:操作同3,。
8.洗滌:操作同5,。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11.測定:以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
操作程序總結(jié)：
計算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5.封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6.底物請避光保存,。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號組分不得混用,。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn),。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃,。
2.有效期:6個月
