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上海乾思生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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ELISA試劑盒的使用方法

時(shí)間：2011/11/15閱讀：686
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Elisa試驗(yàn)是一種敏感性高,，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法,。由于其試劑穩(wěn)定,、易保存，操作簡(jiǎn)便,，結(jié)果判斷較客觀等因素,，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中,。ELISA檢測(cè)試劑盒是用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢測(cè)。
方法一：用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml,。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃ 過(guò)夜。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘,。（簡(jiǎn)稱洗滌,，下同）。
2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃ 孵育1小時(shí),。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔,，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）,。
3.加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃ 孵育0.5～1小時(shí),，洗滌。
4.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘,。
5.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”、“-”號(hào)表示,。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處,，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性,。
方法二：用于檢測(cè)未知抗體的間接法：
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml,，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次,。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌,。（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml,，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌,。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5、6,。
 

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