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中級(jí)會(huì)員 | 第17年

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細(xì)胞培養(yǎng)基的幾點(diǎn)基本要求

時(shí)間:2011/10/27閱讀:918
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    現(xiàn)代生物技術(shù)均通過細(xì)胞作為載體來進(jìn)行,,無論是基因治療,、干細(xì)胞,、克隆技術(shù)都在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的。細(xì)胞的生長(zhǎng)需要一定的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,,用于維持細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基,,即指所有用于各種目的的體外培養(yǎng)、保存細(xì)胞用的物質(zhì),,就其本意上講為人工模擬體內(nèi)生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,,使細(xì)胞在此環(huán)境中有生長(zhǎng)和繁殖的能力。它是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的物質(zhì)基礎(chǔ),。細(xì)胞培養(yǎng)基其組成成分主要有:水,、氨基酸,、維生素、碳水化合物,、無機(jī)離子及其他一些入核酸降解物,、激素等。
    細(xì)胞培養(yǎng)基的基本要求---體外培養(yǎng)的細(xì)胞直接生活在培養(yǎng)基中,,因此培養(yǎng)基應(yīng)能滿足細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分,、促生長(zhǎng)因子、激素,、滲透壓,、pH等諸多方面的要求。
1,、營(yíng)養(yǎng)成分,。維持細(xì)胞生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)條件一般包括以下幾個(gè)方面: 1).氨基酸:是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的原料。所有細(xì)胞都需要12種必須氨基酸:纈氨酸,、亮,、異亮、蘇,、賴,、色,、苯丙,、蛋、組,、酪,、精氨酸、胱氨酸,。此外還需要谷氨酰胺,,它在細(xì)胞代謝過程中有重要作用,所含的氮是核酸中嘌令和嘧啶合成的來源,,同樣也是合成三,、二、一磷酸酰苷所需要的基本物質(zhì),。體外培養(yǎng)的各種培養(yǎng)基內(nèi)都含有必需氨基酸,。2).單糖:培養(yǎng)中的細(xì)胞可以進(jìn)行有氧與無氧酵解,六碳糖是主要能源,。此外六碳糖也是合成某些氨基酸,、脂肪、核酸的原料,。細(xì)胞對(duì)葡萄糖的吸收能力zui高,,半乳糖zui低,。體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí),幾乎所有的培養(yǎng)基或培養(yǎng)液中都以葡萄糖作為必含的能源物質(zhì),。3).維生素:主要扮演輔酶,、輔基的角色,*,。生物素,、葉酸、煙酰胺,、泛酸,、吡哆醇、核黃素,、硫胺素,、維生素B12都是培養(yǎng)基常有的成分。4).無機(jī)離子與微量元素:細(xì)胞生長(zhǎng)除需要鈉,、鉀,、鈣、鎂,、氮和磷等基本元素,,還需要微量元素,如鐵,、鋅,、硒、銅,、錳,、鉬、釩等,。2,、促生長(zhǎng)因子及激素。各種激素,、生長(zhǎng)因子對(duì)于維持細(xì)胞的功能,、保持細(xì)胞的狀態(tài)(分化或未分化)具有十分重要的作用。有些激素對(duì)許多細(xì)胞生長(zhǎng)有促生長(zhǎng)作用,,如胰島素,,它能促進(jìn)細(xì)胞利用葡萄糖和氨基酸。有些激素對(duì)某一類細(xì)胞有明顯促進(jìn)作用,,如氫化可的松可促進(jìn)表皮細(xì)胞的生長(zhǎng),,泌乳素有促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)作用等。3、滲透壓,。細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中,,大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養(yǎng)人體細(xì)胞的理想滲透壓,。鼠細(xì)胞滲透壓在320mOsm/kg左右,。對(duì)于大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞,滲透壓在260-320mOsm/kg的范圍都適宜,。4,、無毒、無污染,。體外生長(zhǎng)的細(xì)胞對(duì)微生物及一些有害有毒物質(zhì)沒有抵抗能力,,因此培養(yǎng)基應(yīng)達(dá)到無化學(xué)物質(zhì)污染、無微生物污染(如細(xì)菌,、真菌,、支原體、病毒等),、無其他對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用的生物活性物質(zhì)污染(如抗體,、補(bǔ)體)。對(duì)于天然培養(yǎng)基,,污染主要來源于取材過程及生物材料本身,,應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格選材,嚴(yán)格操作,。對(duì)于合成培養(yǎng)基,,污染主要來源于配制過程,配制所用的水,,器皿應(yīng)十分潔凈,,配制后應(yīng)嚴(yán)格過濾除菌,。5,、pH。氣體也是細(xì)胞生存的必需條件之一,,所需氣體豐要是氧和二氧化碳,。氧參與三羧酸循環(huán),產(chǎn)生能量供給細(xì)胞生長(zhǎng),、增殖和合成各種成分,。一些細(xì)胞在缺氧情況下,借糖酵解也可獲取能量,,但多數(shù)細(xì)胞缺氧不能生存,。在開放培養(yǎng)時(shí),一般置細(xì)胞于95%空氣加5%二氧化碳的混合氣體環(huán)境中培養(yǎng)。二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物,,也是細(xì)胞所需成分,,它主要與維持培養(yǎng)基的pH有直接關(guān)系。動(dòng)物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件,,pH值約在7.2~7.4℃在細(xì)胞生長(zhǎng)過程中,,隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動(dòng)的加強(qiáng),二氧化碳不斷被釋放,,培養(yǎng)液變酸,,PH值發(fā)生變化。由于NaHCO3容易分解為二氧化碳,,很不穩(wěn)定,,致使緩沖系統(tǒng)難以地控制。故這一緩沖系統(tǒng)適合密閉培養(yǎng),。HEPES結(jié)合碳酸氫鈉使用,,可提供更有效的緩沖體系,主要是防止pH值迅速變動(dòng),,但zui大缺點(diǎn)是在開放培養(yǎng)或觀察時(shí)難以維持正常的pH值,。造成pH波動(dòng)主要是代謝產(chǎn)生的CO2,在封閉式培養(yǎng)過程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸,,培養(yǎng)基pH很快下降,。為解決這一問題,合成培養(yǎng)基中使用了NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng),,并采用開放培養(yǎng),,使細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2及時(shí)溢出培養(yǎng)瓶,再通過穩(wěn)定調(diào)節(jié)溫箱中CO2濃度(5%),,與培養(yǎng)基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài),。

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