乾思 生物編輯整理：培養(yǎng)基（Medium）是供微生物,、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,，一般都含有碳水化合物,、含氮物質(zhì),、無機鹽（包括微量元素）以及維生素和水等,。有的培養(yǎng)基還含有抗菌素和色素,?！　“此迷喜煌煞譃閮深悾簯萌鉁?、馬鈴薯汁等天然成分配制的,，稱為天然培養(yǎng)基；應用化學藥品配成并標明成分的,，稱為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基,。化學試劑中的培養(yǎng)基,，大多為合成培養(yǎng)基,。由于液體培養(yǎng)基不易長期保管，現(xiàn)在均改制成粉末,。培養(yǎng)基由于配制的原料不同,，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同,。一般培養(yǎng)基在受熱,、吸潮后，易被細菌污染或分解變質(zhì),，因此一般培養(yǎng)基必須防潮,、避光,、陰涼處保存。對一些需嚴格滅菌的培養(yǎng)基（如組織培養(yǎng)基）,，較長時間的貯存,，必須放在2~6。C的冰箱內(nèi),?！　〕Ｒ娕囵B(yǎng)基有：　　1、細菌培養(yǎng)基　　配方一 牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基　　牛肉膏0.3克 ,，蛋白胨1.0克,，氯化鈉 0.5克，瓊脂 1.5克,，　　水 100毫升　　在燒杯內(nèi)加水100毫升,，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉,，用蠟筆在燒杯外作上記號后,，放在火上加熱。待燒杯內(nèi)各組分溶解后,，加入瓊脂,，不斷攪拌以免粘底。等瓊脂*溶解后補足失水,，用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH值到7.2～7.6,分裝在各個試管里,，加棉花塞，用高壓蒸汽滅菌30分鐘,?！　∨浞蕉?馬鈴薯培養(yǎng)基　　取新鮮牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀細細剁成肉末后,，加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨,。在燒杯上做好記號，煮沸,，轉(zhuǎn)用文火燉2小時,。過濾，濾出的肉末干燥處理,，濾液pH值調(diào)到7.5左右,。每支試管內(nèi)加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心，滅菌,，備用,。　　配方三 根瘤菌培養(yǎng)基　　葡萄糖 10克 磷酸氫二鉀 0.5克　　碳酸鈣 3克 硫酸鎂 0.2克　　酵母粉 0.4克 瓊脂 20克　　水 1000毫升 1%結(jié)晶紫溶液 1毫升　　先把瓊脂加水煮沸溶解,，然后分別加入其他組分,，攪拌使溶解后,，分裝，滅菌,，備用,。　　2,、放線菌培養(yǎng)基　　配方一 淀粉瓊脂培養(yǎng)基（高氏培養(yǎng)基）　　可溶性淀粉 2克 硝酸鉀 0.1克　　磷酸氫二鉀 0.05克 氯化鈉 0.05克　　硫酸鎂 0.05克 硫酸亞鐵 0.001克　　瓊脂 2克 水 100毫升　　先把淀粉放在燒杯里，用5毫升水調(diào)成糊狀后,，倒入95毫升水,，攪勻后加入其他藥品，使它溶解,。在燒杯外做好記號,，加熱到煮沸時加入瓊脂，不停攪拌,，待瓊脂*溶解后,，補足失水。調(diào)整pH值到7.2～7.4,，分裝后滅菌,，備用?！　∨浞蕉?面粉瓊脂培養(yǎng)基　　面粉 60克 瓊脂 20克　　水 1000毫升　　把面粉用水調(diào)成糊狀,，加水到500毫升，放在文火上煮30分鐘,。另取500毫升水,，放入瓊脂，加熱煮沸到溶解后,，把兩液調(diào)勻,，補充水分，調(diào)整pH值到7.4,，分裝,，滅菌，備用,?！　?、真菌培養(yǎng)基　　配方一 薩市（Sabouraud’s）培養(yǎng)基　　蛋白胨 10克 瓊脂 20克　　麥芽糖 40克 水 1000毫升　　先把蛋白胨,、瓊脂加水后,，加熱，不斷攪拌,，待瓊脂溶解后,，加入40克麥芽糖（或葡萄糖）,，攪拌，使它溶解,，然后分裝,，滅菌，備用,?！　”九囵B(yǎng)菌是培養(yǎng)許多種類真菌所常用的?！　∨浞蕉?馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基　　把馬鈴薯洗凈去皮,，取200克切成小塊，加水1000毫升,，煮沸半小時后,，補足水分。在濾液中加入10克瓊脂,，煮沸溶解后加糖20克（用于培養(yǎng)霉菌的加入蔗糖,，用于培養(yǎng)酵母菌的加入葡萄糖），補足水分,，分裝,，滅菌，備用,?！　“堰@培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2～7.4，配方中的糖,，如用葡萄糖還可用來培養(yǎng)放線菌和芽孢桿菌,。　　配方三 黃豆芽汁培養(yǎng)基　　黃豆芽 100克 瓊脂 15克　　葡萄糖 20克 水 1000毫升　　洗凈黃豆芽,，加水煮沸30分鐘,。用紗布過濾，濾液中加入瓊脂,，加熱溶解后放入糖,，攪拌使它溶解，補足水分到1000毫升,，分裝,，滅菌，備用,?！　“堰@培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2～7.4，可用來培養(yǎng)細菌和放線菌,?！　∨浞剿?豌豆瓊脂培養(yǎng)基　　豌豆 80粒 瓊脂 5克　　水 200毫升　　取80粒干豌豆加水,，煮沸1小時，用紗布過濾后,，在濾液中加入瓊脂,，煮沸到溶解，分裝,，滅菌,，備用?！　?,、食用菌菌種培養(yǎng)基　　配方一 馬鈴薯—蔗糖--瓊脂培養(yǎng)基　　20%馬鈴薯煮汁 1000毫升　　蔗糖 20克 瓊脂 18克　　把馬鈴薯洗凈去皮后，切成小塊,。稱取馬鈴薯小塊200克，加水1000毫升,，煮沸20分鐘后,，過濾。在濾汁中補足水分到1000毫升,，即成20%馬鈴薯煮汁,。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖，煮沸,，使它溶解后,，補足水分，分裝,，滅菌,，備用。使用該培養(yǎng)基對pH值要求不嚴格,，可以不測定,。　　配方二 綜合馬鈴薯培養(yǎng)基　　20%馬鈴薯煮汁 1000 毫升　　磷酸二氫鉀 3克 硫酸鎂 1.5克　　葡萄糖 20克 維生素 10毫克　　瓊脂 18克　　先配制20%馬鈴薯煮汁,，方法同上,。在煮汁中加入上述各種組分,，加熱溶解后補足水分,，調(diào)整pH值到6。分裝,，滅菌,，備用,。該培養(yǎng)基用于培養(yǎng)和保存靈芝、平菇,、香菇等食用菌菌種,?！　?.煙草的培養(yǎng)基　　在植物組織培養(yǎng)時,通過調(diào)節(jié)IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽.CTK/IAA高時,愈傷組織分化芽　　CTK/IAA低時,分化根;CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化　　愈傷組織誘導培養(yǎng)基制備　　以MS培養(yǎng)基母液為基礎,向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL ,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培養(yǎng)基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然后加入實際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖后攪拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調(diào)整pH值至5.8-6.0.加入14g瓊脂,將鋁鍋置于電爐上,攪拌加熱使瓊脂*溶化,然后用蒸餾水定容至終體積2L,繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中.　　煙草葉片愈傷組織誘導　　取一無菌培養(yǎng)皿,用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置于無菌培養(yǎng)皿中,并用解　　剖刀將葉片切成2mm2左右的小片,然后將其接種于準備好的培養(yǎng)基上,每瓶接種　　5小片,一共接種6瓶.接種后的三角平置于24條件下黑暗培養(yǎng)1周,然后在同　　樣溫度下有光照和全黑暗下培養(yǎng)3周直至愈傷組織形成（兩種情況各置3瓶）.觀　　察愈傷組織誘導結(jié)果,統(tǒng)計愈傷組織誘導率.　　器官分化及植株再生培養(yǎng)　　將誘導的愈傷組織按類型分別轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上,置于連續(xù)光照,溫度20-22 C條件下培養(yǎng)3周,統(tǒng)計愈傷組織再生植株情況.　　愈傷組織誘導的總體情況　　煙草愈傷組織誘導培養(yǎng)4周后,愈傷組織基本形成,即排除因生長時間不夠而　　未形成愈傷的情況.具體情況見表一中所示,6瓶培養(yǎng)物均有愈傷形成,且都未發(fā)　　生污染,但誘導率幾乎各不相同.其中, 在光照條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導率為　　60.0℅, 在黑暗條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導率為46.7%.由于實驗過程中,外植　　體即煙草葉片取得偏小,接種時可能已有部分外植體的大部分細胞脫水死亡,使整　　個實驗的愈傷組織誘導率偏低,愈傷塊偏小.　　培養(yǎng)基還有:1640培養(yǎng)基　　特殊培養(yǎng)基：　　一 選擇性培養(yǎng)基　　1酵母菌富集培養(yǎng)基　　葡萄糖5% 尿素0.1% 硫化銨0.1% 磷酸二氫鉀0.25% 磷酸氫二鈉0.05% 七水合硫酸鎂0.1% 七水合硫酸鐵0.01% 酵母膏0.05%　　孟加拉紅0.003% pH4.5　　2 Ashby無氮培養(yǎng)基 富集好養(yǎng)自生固氮菌　　甘露醇1% 磷酸二氫鉀0.02% 七水合硫酸鎂0.02% 氯化鈉0.02%　　二水合硫酸鈣0.01% 碳酸鈣0.5%　　二 鑒別培養(yǎng)基　　EMB培養(yǎng)基，常用于鑒別E.coli　　蛋白胨 10g 乳糖5g 蔗糖5g 磷酸氫二鉀2g 伊紅Y 0.4g 美藍0.065g　　蒸餾水1000g pH7.2　　分離海洋微生物的培養(yǎng)基配方　　2216E培養(yǎng)基配方（固體培養(yǎng)基）　　蛋白胨 5克　　酵母膏 1克　　磷酸高鐵 0.01克　　瓊脂 15-----20克　　陳海水 1000毫升　　煮沸氫氧化納（5%）的溶液調(diào)PH值7.6—7.8　　其他培養(yǎng)基：　　1.高氏一號培養(yǎng)基　　KNO3:1g,　　NaCl:0.5g,　　K2HPO4:0.5g　　MgSO4·7H2O：0.5g　　FeSO4·7H2O：0.01g　　可溶性淀粉20g　　瓊脂20g　　蒸餾水1000ml　　pH調(diào)至7.2~7.4,，121°C滅菌30min　　制法：先用少量水將淀粉調(diào)成糊狀,，再取700ml水在電爐上加熱煮沸　　然后邊攪拌便將淀粉糊倒入，同時保持沸騰,。然后再將其他成分加入,，　　溶解后補足水分至1000ml　　肉湯蛋白胨斜面：　　蛋白胨10g　　牛肉膏5g　　蒸餾水1000ml　　NaCl：5g　　pH：7.0~7.2，121℃滅菌20min　　如配制固體培養(yǎng)基需加瓊脂1.5%~2%,半固體培養(yǎng)基可加瓊脂0.5%~0.8%　　不同的細胞培養(yǎng)基　　天然細胞培養(yǎng)基　　天然培養(yǎng)基是指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基,，如血漿,、GIBCO胎牛血清、淋巴液,、雞胚浸出液等,。組織培養(yǎng)技術建立早期，體外培養(yǎng)細胞都是利用天然培養(yǎng)基,。但是由于天然培養(yǎng)基制作過程復雜,、批間差異大，因此逐漸為合成培養(yǎng)基所替代,。目前廣泛使用的天然培養(yǎng)基是GIBCO胎牛血清,，另外各種組織提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細胞也是*,?！　IBCO胎牛血清種類　　目前用于組織培養(yǎng)的GIBCO胎牛血清主要是牛GIBCO胎牛血清，培養(yǎng)某些特殊細胞也用人GIBCO胎牛血清,、馬GIBCO胎牛血清等,。選擇用牛GIBCO胎牛血清培養(yǎng)細胞的原因：來源充足、制備技術成熟,、經(jīng)過長時間的應用考驗人們對其有比較深入的理解,。牛GIBCO胎牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的，但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物GIBCO胎牛血清更合適,?！　∨IBCO胎牛血清是細胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,，具有極為重要的功能,。牛GIBCO胎牛血清分為小牛GIBCO胎牛血清、新牛GIBCO胎牛血清,、胎牛GIBCO胎牛血清,。胎牛GIBCO胎牛血清應取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛GIBCO胎牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛；小牛GIBCO胎牛血清取自出生10－30天的小牛,。顯然,，GIBCO胎牛血清是品質(zhì)zui高的，因為胎牛還未接觸外界,，GIBCO胎牛血清中所含的抗體,、補體等對細胞有害的成分zui少?！　IBCO胎牛血清的主要成分　　GIBCO胎牛血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚,，且GIBCO胎牛血清組成及含量常隨供血動物的性別,、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異,。GIBCO胎牛血清中含有各種血漿蛋白,、多肽、脂肪,、碳水化合物,、生長因子、激素,、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的,?！　IBCO胎牛血清主要作用　　1. 提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素,、無機物,、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等,，是細胞生長必須的物質(zhì),。　　2. 提供激素和各種生長因子：胰島素,、腎上腺皮質(zhì)激素（地塞米松）,、類固醇激素（雌二醇、睪酮,、孕酮）等,。生長因子如成纖維細胞生長因子、表皮生長因子,、血小板生長因子等,。　　3. 提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素,、脂肪,、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵,。結(jié)合蛋白在細胞代謝過程中起重要作用,。　　4. 提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷,?！　?. 對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用：有一些細胞，如內(nèi)皮細胞,、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,，GIBCO胎牛血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用,。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,，現(xiàn)在則有目的的使用GIBCO胎牛血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被廣泛用于貼壁細胞的消化傳代,。GIBCO胎牛血清蛋白形成了GIBCO胎牛血清的粘度,，可以保護細胞免受機械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時,，粘度起到重要作用,。GIBCO胎牛血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝解毒中起重要作用,，如SeO3,硒等,。　　GIBCO胎牛血清培養(yǎng)基主要問題　　1. GIBCO胎牛血清的成份可能有幾百種之多,，目前對其準確的成份,、含量及其作用機制仍不清楚，尤其是對其中一些多肽類生長因子,、激素和脂類等尚未充分認識,，這給研究工作帶來許多困難?！　?. GIBCO胎牛血清都是批量生產(chǎn),，各批量之間差異很大，而且GIBCO胎牛血清保存期至多一年,，因此,，要保證每批GIBCO胎牛血清的相似性極為困難，從而使實驗的標準化和連續(xù)性受到限制,?！　?. 對大多數(shù)細胞,，在體內(nèi)狀態(tài)，GIBCO胎牛血清不是它們接觸的生理學液體,，只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸GIBCO胎牛血清,，因此使用GIBCO胎牛血清有可能改變某種細胞在體內(nèi)的正常狀態(tài)，GIBCO胎牛血清可能促進某些細胞的生長（成纖維細胞）同時抑制另一類細胞生長（表皮細胞）,?！　?. GIBCO胎牛血清含一些對細胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶,，能與來自高度繁殖細胞的多胺反應（如精胺,、亞精胺）形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體,、抗體,、細菌毒素等都會影響細胞生長，甚至造成細胞死亡,?！　?. 動物個體不同，GIBCO胎牛血清產(chǎn)地,、批號不同,，每批質(zhì)量差異甚大，其成分不能保持一致,?！　?. 取材中可能帶入支原體、病毒,，對細胞產(chǎn)生潛在影響,，可能導致實驗失敗或?qū)嶒灲Y(jié)果不可靠性?！　?. 大規(guī)模生產(chǎn)中，GIBCO胎牛血清來源越來越困難,，價格昂貴,，是構(gòu)成動物細胞培養(yǎng)對生產(chǎn)成本的主要部分之一?！　IBCO胎牛血清的質(zhì)量標準　　GIBCO胎牛血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素：一是取材對象,，二是取材過程。用于取材的動物應健康無病并且在的出生天數(shù)之內(nèi),，取材過程應嚴格按照操作規(guī)程執(zhí)行,，制備出的GIBCO胎牛血清要經(jīng)過嚴格的質(zhì)量鑒定。WHO公布的《用動物細胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求：　　1. 牛GIBCO胎牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家,。并應具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng),。　　2. 有些國家還要求牛GIBCO胎牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群?！　?. 證明所用牛GIBCO胎牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物,。　　4. GIBCO胎牛血清要通過濾膜過濾除菌,，保證無菌,。　　5. 無細菌,、霉菌,、支原體和病毒的污染，有些國家要求無細菌噬菌體污染,?！　?. 對細胞有良好的支持繁殖作用?！　∥覈趯εIBCO胎牛血清的質(zhì)量2000年版《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標準》中提出比較嚴格的標準要求,。包括蛋白質(zhì)含量，細菌,、真菌,、支原體、牛病毒,、大腸桿菌噬菌體,、細菌內(nèi)毒素，支持細胞增殖檢查,。

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