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人肝癌細胞阿霉素耐藥株

時間:2018/6/11閱讀:413
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  Q1. 液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好?還是冷凍好,?

  要冷藏?。∫驗橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時,,其溶液的pH值會發(fā)生改變,,溶液往往變堿,某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利,。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中,,通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年,。


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  Q2. 液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用,及使用方法,。

  幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求,,細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì),在缺少谷氨酰胺時,,細胞生長不良而死亡,。所以,各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺,。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,,應(yīng)置-20 ?C冰凍保存,用前加入培養(yǎng)基中,。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時,,應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺?;A(chǔ)醫(yī)學(xué)細胞中心在其服務(wù)項目中配制分裝了高濃度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支),。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養(yǎng)基中,其終濃度為2mM/ml培養(yǎng)基,。包裝為粉紅色,,-24?C保存。


  Q3.細胞計數(shù)及存活測試
1,、原理:
(1)計算細胞數(shù)目可用血球計數(shù)盤或是Coultercounter粒子計數(shù)器自動計數(shù),。
(2)血球計數(shù)盤一般有二個chambers,每個chamber中細刻9個1mm2大正方形,,其中4個角落之正方形再細刻16個小格,,深度均為0.1mm。當chamber上方蓋上蓋玻片后,,每個大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml,。使用時,計數(shù)每個大正方形內(nèi)之細胞數(shù)目,,乘以稀釋倍數(shù),,再乘以104,即為每ml中之細胞數(shù)目,。
(3)存活測試之步驟為dyeexclusion,,利用染料會滲入死細胞中而呈色,而活細胞因細胞膜完整,,染料無法滲入而不會呈色,。一般使用藍色之trypan blue染料,如果細胞不易吸收trypan blue,,則用紅色之Erythrosin bluish,。計算細胞活率:活細胞數(shù)/(活細胞數(shù)+死細胞數(shù))×100%,。計數(shù)應(yīng)在臺盼蘭染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成,隨時間延長,,部分活細胞也開始攝取染料;因為臺盼蘭對蛋白質(zhì)有很強的親和力,,用不含血清的稀釋液,可以使染色計數(shù)更為準確,。


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  Q4.細胞特性
在細胞培養(yǎng)之前,,我們要了解一下你所要養(yǎng)細胞的基本特性,,這點可以從細胞的產(chǎn)品說明書或者從ATCC細胞庫查詢。除此之外我們還要知道每管細胞的數(shù)量,,建議分裂或傳代的比例,,和已知細胞的傳代代次等信息。


  Q5.準備培養(yǎng)基
復(fù)蘇細胞時需要準備合適的培養(yǎng)基,,血清和細胞生長所需的添加劑,。大部分培養(yǎng)細胞所用的培養(yǎng)體系,可以在訂購細胞系時獲得,。
雖然大多數(shù)細胞系可以在不止一種培養(yǎng)基中生長,,但是當培養(yǎng)基改變時,細胞的性質(zhì)也會變化,。因此,,使用細胞庫推薦的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞會獲得的效果。


  Q6.開啟凍存管
1.準備一個培養(yǎng)瓶,,加入適宜細胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基,,液體體積按照說明書的推薦配置,并平衡培養(yǎng)基的溫度和pH(CO2),?!?br />2.在37℃水浴中或細胞的正常生長溫度下將凍存管輕輕搖動。解凍要快,,約2分鐘或直到冰晶融化即可,。
3.從水浴中取出凍存管并用浸泡或噴灑70%乙醇的方式來消毒。進一步的操作均需在無菌操作臺中嚴格無菌條件下進行,。
4.擰開凍存管的管帽并將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到一個含有9 ml推薦培養(yǎng)基的無菌離心管中,。通過溫和離心(125×g 10 min)除去冷凍保護劑(DMSO)。棄去上清,,并用1或2 ml*培養(yǎng)基重懸細胞,。將這些細胞懸液轉(zhuǎn)移到含有*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中并輕輕搖動以*混勻。
5.培養(yǎng)24小時后檢查細胞狀態(tài)并在需要時進行傳代。


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  Q7. 培養(yǎng)用液pH對細胞生長的影響

  由于,大多數(shù)細胞適宜pH為7.2~7.4,,偏離此范圍對細胞將產(chǎn)生有害的影響,。各種細胞對pH的要求也不*相同,,原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差,,無限細胞系耐受力強。


  但總體來說,,細胞耐酸性比耐堿性強一些,,偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。因此,,我們在配制培養(yǎng)用液時,,可把液體的pH稍微調(diào)得偏酸一些。液體在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時,,溶液的pH還會向上浮動0.2左右,。


  質(zhì)量可靠,售后有保障(編輯:tanxi)

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