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怎樣選擇色譜柱
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現(xiàn)代液相色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇,。但是色譜填料的選擇范圍很寬,，要做合適的選擇,，必須對此有一定的認(rèn)識和了解。
1,、正相色譜
正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）,，以及其他具有極性官能團(tuán)，如胺基團(tuán)（NH2,APS）和氰基團(tuán)（CN,，CPS）的鍵合相填料,。
由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他團(tuán)的極性較強(qiáng)，因此,，分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小,，即極性強(qiáng)弱的組份zen先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,，如：正乙烷（Hexane）,氯仿（Chloroform）,二氯甲烷（Methylene Chloride）等,。
2、反相色譜
反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ),，表面鍵合有極性相對較弱的官能團(tuán)的鍵合相,。反相色譜所使用的流動相極性較強(qiáng)，通常為水,，緩沖液與甲醇,，已腈等混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)組合zen先被沖出,，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強(qiáng)的保留,。常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）,、C4（B）,、C6H5（Phenyl）等。
二,、聚合物填料
聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,，其主要優(yōu)點(diǎn)是在PH值為1～14均可使用。相對與硅膠基質(zhì)的C18填料,，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性,；大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。現(xiàn)在的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對硅膠基質(zhì)填料,，色譜柱柱效較低,。
三、其他無機(jī)填料
其它HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化,。由于其特殊的性質(zhì),，一般于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料,。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相,，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ),，不再需其它的表面改性，該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng),，石墨化碳可用于分離某些幾何導(dǎo)構(gòu)體,，又由于HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用,。氧化鋁也可用于HPLC,，氧化鋁微粒剛性強(qiáng)，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,，其優(yōu)點(diǎn)是可在PH高達(dá)12的流動相中使用,。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定的限制,，所以未能廣泛應(yīng)用,，新型氧化鋯填料也可用于HPLC，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,，應(yīng)用PH范圍1～14,，溫度可達(dá)100℃。由于氧化鋯填料幾年才開始研究,，加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度,，其重要用途與優(yōu)勢尚在進(jìn)行中。