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流動相的pH應在使用范圍內
以硅膠為基質的反相色譜柱的pH范圍為2~9,流動相超過其pH范圍將會導致硅膠基質流失和鍵合相碳鏈斷裂,,使柱效下降,,壽命變短。
去除樣品和流動相匯總的固體顆粒
樣品和流動相中含有固體顆粒物質會堵塞色譜柱篩板,,不僅會引起柱壓的升高,,而且也會引起柱效下降。因此,,建議使用超純水和色譜純試劑,,在分析前對樣品進行針筒過濾,流動相過0.45um濾膜,。
使用保護柱或在線過濾器
保護柱和在線過濾器上都有篩板,,其孔徑與色譜柱篩板孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質到達色譜柱,,有效防止色譜柱篩板的堵塞,。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例,因此除對樣品和流動相進行過濾外,,建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器,。
正確使用緩沖鹽
緩沖鹽使用不當會使其在流動相(含有機溶劑)中析出,堵塞填料基質上的微孔和顆粒間的空隙,,使填料板結,,柱壓上升;同時阻礙了基質上的鍵合的碳鏈自由舒展,,使用色譜柱的保留能力下降,,柱效降低,。
建議使用前要過濾,,使用后要沖洗。具體方法如下:
1,、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需要過濾流動相1.0ml/min流速沖洗60min.
2,、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前,用與初始流動相組成相同的過濾流動相似1.0ml/min流速沖洗60min,;分析完成后,,再用該過濾流動以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設定應盡量平緩,,以避免梯度過程中緩沖鹽析出,。
柱清洗方法:
1,、未使用緩沖鹽:每天分析完成后,用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱60min,。
2,、使用過緩沖鹽:分析完成后,先后用上述方法除去緩沖鹽,,然后再用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱60min,。