您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)
18
各種離心機(jī)的分離方法,！
離心機(jī)的分離方法：
1. 差速沉降離心法：
這是*普通的離心法。即采用逐漸增加離心速度或低速和高速交替進(jìn)行離心,，使沉降速度不同的顆粒,，在不同的離心速度及不同離心時間下分批分離的方法。此法一般用于分離沉降系數(shù)相差較大的顆粒,。
差速離心首先要選擇好顆粒沉降所需的離心力和離心時間,。當(dāng)以一定的離心力在一定的離心時間內(nèi)進(jìn)行離心時，在離心管底部就會得到*大和*重顆粒的沉淀,，分出的上清液在加大轉(zhuǎn)速下再進(jìn)行離心,，又得到第二部分較大較重顆粒的沉淀及含較小和較輕顆粒的上清液，如此多次離心處理,，即能把液體中的不同顆粒較好地分離開,。此法所得的沉淀是不均一的，仍雜有其它成分,，需經(jīng)過2～3次的再懸浮和再離心,，才能得到較純的顆粒。
此法主要由于組織勻漿液中分離細(xì)胞器和病毒,，其優(yōu)點(diǎn)是：操作簡易,，離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開，并可使用容量較大的角式轉(zhuǎn)子,。缺點(diǎn)是：須多次離心,，沉淀中有夾帶，分離效果差,，不能一次得到純顆粒,，沉淀于管底的顆粒受擠壓，容易變性失活,。
2. 密度梯度區(qū)帶離心法（簡稱區(qū)帶離心法）：
區(qū)帶離心法是將樣品加在惰性梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心沉降或沉降平衡,，在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區(qū)帶的分離方法。此法的優(yōu)點(diǎn)是：①分離效果好,，可一次獲得較純顆粒,；②適應(yīng)范圍廣，能象差速離心法一樣分離具有沉降系數(shù)差的顆粒,，又能分離有一定浮力密度差的顆粒,；③顆粒不會擠壓變形，能保持顆?；钚?，并防止已形成的區(qū)帶由于對流而引起混合。
此法的缺點(diǎn)是：①離心時間較長,；②需要制備惰性梯度介質(zhì)溶液,；③操作嚴(yán)格，不易掌握,。
密度梯度區(qū)帶離心法又可分為兩種：
（1）差速區(qū)帶離心法：當(dāng)不同的顆粒間存在沉降速度差時（不需要像差速沉降離心法所要求的那樣大的沉降系數(shù)差）。在一定的離心力作用下,，顆粒各自以一定的速度沉降,，在密度梯度介質(zhì)的不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法稱為差速區(qū)帶離心法。此法僅用于分離有一定沉降系數(shù)差的顆粒（20% 的沉降系數(shù)差或更少）或分子量相差3倍的蛋白質(zhì),，與顆粒的密度無關(guān),，大小相同，密度不同的顆粒（如線粒體,，溶酶體等）不能用此法分離,。
離心管先裝好密度梯度介質(zhì)溶液，樣品液加在梯度介質(zhì)的液面上,，離心時,，由于離心力的作用，顆粒離開原樣品層,，按不同沉降速度向管底沉降,，離心一定時間后，沉降的顆粒逐漸分開,，*后形成一系列界面清楚的不連續(xù)區(qū)帶,，沉降系數(shù)越大，往下沉降越快,，所呈現(xiàn)的區(qū)帶也越低,，離心必須在沉降*快的大顆粒到達(dá)管底前結(jié)束，樣品顆粒的密度要大于梯度介質(zhì)的密度,。梯度介質(zhì)通常用蔗糖溶液,，其*大密度和濃度可達(dá)1.28 kg/cm3和60％。此離心法的關(guān)鍵是選擇合適的離心轉(zhuǎn)速和時間。
（2）等密度區(qū)帶離心法：離心管中預(yù)先放置好梯度介質(zhì),，樣品加在梯度液面上,，或樣品預(yù)先與梯度介質(zhì)溶液混合后裝入離心管，通過離心形成梯度,，這就是預(yù)形成梯度和離心形成梯度的等密度區(qū)帶離心產(chǎn)生梯度的二種方式,。離心時，樣品的不同顆粒向上浮起,，一直移動到與它們的密度相等的等密度點(diǎn)的特定梯度位置上,，形成幾條不同的區(qū)帶，這就是等密度離心法,。體系到達(dá)平衡狀態(tài)后,，再延長離心時間和提高轉(zhuǎn)速已無意義，處于等密度點(diǎn)上的樣品顆粒的區(qū)帶形狀和位置均不再受離心時間所影響,，提高轉(zhuǎn)速可以縮短達(dá)到平衡的時間,，離心所需時間以*小顆粒到達(dá)等密度點(diǎn)（即平衡點(diǎn)）的時間為基準(zhǔn)，有時長達(dá)數(shù)日,。等密度離心法的分離效率取決于樣品顆粒的浮力密度差,，密度差越大，分離效果越好,，與顆粒大小和形狀無關(guān),，但大小和形狀決定著達(dá)到平衡的速度、時間和區(qū)帶寬度,。等密度區(qū)帶離心法所用的梯度介質(zhì)通常為氯化絕CSCl,，其密度可達(dá)1.7g/cm3。此法可分離核酸,、亞細(xì)胞器等,，也可以分離復(fù)合蛋白質(zhì)，但簡單蛋白質(zhì)不適用,。
收集區(qū)帶的方法有許多種,，例如：
（1） 用注射器和滴管由離心管上部吸出。
（2） 有針刺穿離心管底部滴出,。
（3） 用針刺穿離心管區(qū)帶部份的管壁,，把樣品區(qū)帶抽出。
（4）用一根細(xì)管插入離心管底,，泵入超過梯度介質(zhì)*大密度的取代液,，將樣品和梯度介質(zhì)壓出，用自動部分收集器收集,。