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紫外分光光度計組成部件以及測定步驟
一,、紫外分光光度計作用和組成部件
許多有機(jī)化合物在紫外區(qū)具有特征的吸收光譜,，因此可用紫外分光光度法對有機(jī)物質(zhì)進(jìn)行定性鑒定，結(jié)構(gòu)分析及定量測定．紫外分光光度法定量測定的依據(jù)是比耳定律,。首先確定化合物的紫外吸收光譜,，確定zui大吸收波長。在選定的波長下,，作出化合物溶液的工作曲線,，根據(jù)在相同條件下測得待測液的吸光度值來確定待測液中化合物的含量。凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物,，根據(jù)在特定吸收波長處所測得的吸收度,，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定,?？梢?紫外分光光度計。其應(yīng)用波長范圍為200～400nm的紫外光區(qū),、400～850nm的可見光區(qū),。紫外分光光度計主要由輻射源（光源）、色散系統(tǒng),、檢測系統(tǒng)、吸收池,、數(shù)據(jù)處理機(jī),、自動記錄器及顯示器等部件組成。
許多有機(jī)化合物在紫外區(qū)具有特征的吸收光譜,，因此可用紫外分光光度法對有機(jī)物質(zhì)進(jìn)行定性鑒定，結(jié)構(gòu)分析及定量測定．紫外分光光度法定量測定的依據(jù)是比耳定律,。首先確定化合物的紫外吸收光譜,，確定zui大吸收波長。在選定的波長下,，作出化合物溶液的工作曲線,，根據(jù)在相同條件下測得待測液的吸光度值來確定待測液中化合物的含量。凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物,，根據(jù)在特定吸收波長處所測得的吸收度,，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定,?？梢?紫外分光光度計。其應(yīng)用波長范圍為200～400nm的紫外光區(qū),、400～850nm的可見光區(qū),。紫外分光光度計主要由輻射源（光源）、色散系統(tǒng),、檢測系統(tǒng)、吸收池,、數(shù)據(jù)處理機(jī),、自動記錄器及顯示器等部件組成。
二,、手動紫外分光光度計與自動紫外分光光度計的區(qū)別
手動紫外分光光度計是帶刻度盤顯示波長的,，只能用手動調(diào)節(jié)波長大小。
自動紫外分光光度計是LCD或LED顯示波長的,，通過設(shè)置鍵選擇需要的波長,，再有馬達(dá)傳動走到設(shè)置的波長。
手動紫外分光光度計是帶刻度盤顯示波長的,，只能用手動調(diào)節(jié)波長大小。
自動紫外分光光度計是LCD或LED顯示波長的,，通過設(shè)置鍵選擇需要的波長,，再有馬達(dá)傳動走到設(shè)置的波長。
三,、紫外分光光度計測定樣品步驟
1,、首先,，知道所需要測量物質(zhì)的特征吸收波長是多少，這個可在國家標(biāo)準(zhǔn),、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或方法,。例如測量總氮的話，就需要220和275nm這2個波長,，所以必須買紫外的光度計,，并且?guī)щp波長測定功能，例如測總磷是697nm,，只需買臺可見光度計就可以了,。
2、第二步：知道所測量的物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方法,，需要哪些儀器和設(shè)備,，還有玻璃器皿等，同時還有比較完成測量所需要的所有化學(xué)試劑等,。這個可以在標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒?yàn)方法中找到,，基本在互聯(lián)網(wǎng)上都可以找到電子版的測量方法。
3,、第三步：配置好所需測量物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液,，一般是5~8個標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度建議從高到低,，建議每個不同濃度貼上標(biāo)簽,，以防順序搞錯。注意,，部分實(shí)驗(yàn)需要往標(biāo)準(zhǔn)溶液中加顯色劑之后才可以用光度計進(jìn)行測量,。
4、第四步：設(shè)置好光度計的測量波長,，這就需要熟悉光度計的基本操作,，一般測量物質(zhì)的濃度都是用的標(biāo)準(zhǔn)曲線法，就是對應(yīng)光度計中的定量測量功能,。具體操作時*步,，把儀器的波長調(diào)整到我們所需要的波長，例如測量總磷直接把波長走到697nm,，之后放入裝好蒸餾水的比色皿到樣品室做空白,，就是熟稱的調(diào)零。第三部把標(biāo)準(zhǔn)溶液放入樣品室,，依次測量他們的吸光度,，儀器一般會自動記錄之后就會給出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，實(shí)驗(yàn)完畢。如果儀器不能直接記錄吸光度,，可以先記在筆記本上,，之后用excel軟件進(jìn)行計算標(biāo)準(zhǔn)曲線。判斷做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線是否能用,，看哪個R值即那個相關(guān)系數(shù),，一般zui少做出0.999就可以用了，差一點(diǎn)的儀器也可以做出0.99.
5,、第五步：把未知樣品放入樣品室就可以直接測量出樣品濃度,。
1,、首先,，知道所需要測量物質(zhì)的特征吸收波長是多少，這個可在國家標(biāo)準(zhǔn),、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或方法,。例如測量總氮的話，就需要220和275nm這2個波長,，所以必須買紫外的光度計,，并且?guī)щp波長測定功能，例如測總磷是697nm,，只需買臺可見光度計就可以了,。
2、第二步：知道所測量的物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方法,，需要哪些儀器和設(shè)備,，還有玻璃器皿等，同時還有比較完成測量所需要的所有化學(xué)試劑等,。這個可以在標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒?yàn)方法中找到,，基本在互聯(lián)網(wǎng)上都可以找到電子版的測量方法。
3,、第三步：配置好所需測量物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液,，一般是5~8個標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度建議從高到低,，建議每個不同濃度貼上標(biāo)簽,，以防順序搞錯。注意,，部分實(shí)驗(yàn)需要往標(biāo)準(zhǔn)溶液中加顯色劑之后才可以用光度計進(jìn)行測量,。
4、第四步：設(shè)置好光度計的測量波長,，這就需要熟悉光度計的基本操作,，一般測量物質(zhì)的濃度都是用的標(biāo)準(zhǔn)曲線法，就是對應(yīng)光度計中的定量測量功能,。具體操作時*步,，把儀器的波長調(diào)整到我們所需要的波長，例如測量總磷直接把波長走到697nm,，之后放入裝好蒸餾水的比色皿到樣品室做空白,，就是熟稱的調(diào)零。第三部把標(biāo)準(zhǔn)溶液放入樣品室,，依次測量他們的吸光度,，儀器一般會自動記錄之后就會給出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，實(shí)驗(yàn)完畢。如果儀器不能直接記錄吸光度,，可以先記在筆記本上,，之后用excel軟件進(jìn)行計算標(biāo)準(zhǔn)曲線。判斷做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線是否能用,，看哪個R值即那個相關(guān)系數(shù),，一般zui少做出0.999就可以用了，差一點(diǎn)的儀器也可以做出0.99.
5,、第五步：把未知樣品放入樣品室就可以直接測量出樣品濃度,。
四、紫外分光光度計連續(xù)測量一個樣品,，沒拿出來出現(xiàn)吸收值下降原因
這是由于開始外壁上的溶液沒有擦干凈,，需檢查一下儀器是否穩(wěn)定，是否存在儀器造成的基線漂移,，如果是同一個比色皿沒有更換待測樣品溶液的話,，便是儀器的問題，如果波動范圍為千分之幾的波動誤差,，大可以忽略不計,。另外，可在此波長下,，用純水連續(xù)多次測定來觀測機(jī)器的穩(wěn)定性,。有可能是儀器不太穩(wěn)定：1.儀器沒有事先預(yù)熱，不穩(wěn)定,；2.光源已經(jīng)不行啦,；3.聚集體隨著時間分解了，感覺不對路兩種可能：氘燈壽命出了問題,；重新放入的樣如果不是一個容量瓶的話,，建議做下溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)考慮是否是檢測器的問題，當(dāng)拿出樣品打開蓋光源遮住,。
這是由于開始外壁上的溶液沒有擦干凈,，需檢查一下儀器是否穩(wěn)定，是否存在儀器造成的基線漂移,，如果是同一個比色皿沒有更換待測樣品溶液的話,，便是儀器的問題，如果波動范圍為千分之幾的波動誤差,，大可以忽略不計,。另外，可在此波長下,，用純水連續(xù)多次測定來觀測機(jī)器的穩(wěn)定性,。有可能是儀器不太穩(wěn)定：1.儀器沒有事先預(yù)熱，不穩(wěn)定,；2.光源已經(jīng)不行啦,；3.聚集體隨著時間分解了，感覺不對路兩種可能：氘燈壽命出了問題,；重新放入的樣如果不是一個容量瓶的話,，建議做下溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)考慮是否是檢測器的問題，當(dāng)拿出樣品打開蓋光源遮住,。