自從60年前紫外分光光度計(jì)出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室的工作臺(tái)之后,,已經(jīng)形成了一種能解決廣泛難題的儀器,從單一波長(zhǎng)的測(cè)量到高性能多光譜的測(cè)量分析,??茖W(xué)家們選擇時(shí)需要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室的需要和目的用途來(lái)考慮,光學(xué)構(gòu)造和光源,、探測(cè)方法,、樣品類(lèi)型和數(shù)據(jù)處理等都是要考慮的因素,。
光學(xué)構(gòu)造
一般來(lái)說(shuō),,紫外光分光光度計(jì)分為單光束和雙光束兩類(lèi)。顧名思義,,單光束型主要是依賴(lài)單束光進(jìn)行測(cè)量,。一束給定波長(zhǎng)的光通過(guò)對(duì)照物,然后再通過(guò)實(shí)際樣品溶液,,就能得到吸光結(jié)果,。
雙光束型則是通過(guò)一個(gè)斬光輪將一束光分成兩束,分別測(cè)量對(duì)照樣品和實(shí)際樣品,??梢孕』馄坪蜏p少測(cè)量時(shí)間。一些雙光型光度計(jì)不利用斬光輪,,而是利用一種光束分光器來(lái)代替,,將一束光分成兩束平行的光然后同時(shí)測(cè)量對(duì)照樣品和目的樣品,。因?yàn)樵黾恿藴y(cè)量的速度,所以雙光束分光光度計(jì)在測(cè)量一些溶液隨時(shí)間動(dòng)態(tài)變化的研究中大有用處,。
光源和檢測(cè)方法
分光光度計(jì)的光譜也是需要考慮的一個(gè)重要因素,。實(shí)驗(yàn)室研究人員希望省錢(qián)購(gòu)入專(zhuān)門(mén)儀器定量核酸、蛋白或者細(xì)菌的生長(zhǎng)情況,。果果需要更大的靈活性,,研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器,可以程序性地進(jìn)行ELISAs分析和比色分析,。
紫外分光光度計(jì)一般覆蓋190nm和380nm波長(zhǎng),,通常利用氘燈照明。一些特殊的儀器可以提供滿(mǎn)足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍,。
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光,、可見(jiàn)光和甚至紅外光(780 nm 至3,000 nm)。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見(jiàn)光部分(大約380 nm 到800 nm),。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見(jiàn)光區(qū)域,。
分光光度計(jì)的帶寬很大程度上依賴(lài)于單色儀的狹縫的寬度??梢酝渡涑鰧?shí)驗(yàn)準(zhǔn)確要求的光譜,。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對(duì)復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測(cè)量??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺(tái)分光光度計(jì)滿(mǎn)足多種實(shí)驗(yàn)需要,。
為了測(cè)量吸光值,分光光度計(jì)制造商通常使用光電倍增管和光敏二極管,。PMTs提供快速的反應(yīng)時(shí)間和良好的靈敏度,,并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商依賴(lài)于光敏二極管的動(dòng)態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測(cè)量,。
樣品類(lèi)型
在大部分的樣品類(lèi)型中,,分光光度計(jì)可接受樣品孔、小玻璃管cuvette,、吸漿管和微孔板,。微孔板主要是滿(mǎn)足高通量的需要和大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室需求。但盡管對(duì)于小實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō),,制造商仍然提供了多種容器轉(zhuǎn)換器來(lái)滿(mǎn)足通量的要求和減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間,。
用小試管cuvette裝樣品容量一般從1 μl-5ml,并且一些儀器裝備了各種樣品固定物來(lái)滿(mǎn)足各種改變需要,。體現(xiàn)了柔韌性,。
數(shù)據(jù)管理
大部分單機(jī)型的分光光度計(jì)包含了驅(qū)動(dòng)儀器運(yùn)行和管理數(shù)據(jù)的軟件。高性能的儀器,,通常與PC機(jī)一起聯(lián)用,,需要從制造商提供額外的軟件,。同時(shí)用戶(hù)也可以選擇升級(jí)軟件以滿(mǎn)足他們的需要。