一,、實驗原理
毛細(xì)管電泳是離子或荷電離子以電場為驅(qū)動力，在毛細(xì)管中根據(jù)淌度或/和分配系數(shù)的差異進(jìn)行快速分離的一種電泳技術(shù),。毛細(xì)管電泳和傳統(tǒng)電泳的根本區(qū)別在于前者設(shè)法使電泳過程在散熱效率*的毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行,，從而可以引入高的電場強度，*分離質(zhì)量,。
電泳時,，毛細(xì)管內(nèi)部首先充滿分離緩沖溶液，樣品從毛細(xì)管的一端導(dǎo)入,，當(dāng)毛細(xì)管兩端加上一定的電壓后,，荷電溶質(zhì)便朝與其極性相反的電極方向移動，由于樣品各組分間淌度不同,，引起遷移速度的差異,，因而經(jīng)過一定時間后，各組分按其淌度大小順序,，依次到達(dá)檢測器被檢出,，得到按時間分布的電泳圖譜。
本實驗系采用無膠篩分原理分離SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物,，并用于蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量測定,，電泳分離SDS-蛋白質(zhì)及測定相對分子質(zhì)量的原理。無膠篩分是在常規(guī)CGE技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的,，后者與傳統(tǒng)的平板凝膠電泳分離的原理無異,，都是根據(jù)分子的大小分離。我們知道,，凝膠篩分介質(zhì)是指以化學(xué)交聯(lián)方式形成的膠狀多孔物質(zhì),，一旦成型，即很難改變,，如聚丙烯酰胺,。所謂無膠篩分介質(zhì)是由纏繞的聚合物以物理方式組成的分離介質(zhì) ，如線形聚丙烯酰胺,、纖維素衍生物等,，在溶液中形成一定大小的動態(tài)孔徑,，在CGE中，凝膠毛細(xì)管柱制備困難,，壽命短,，進(jìn)樣易堵塞等缺點，在CE的應(yīng)用受到很大限制,。而采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度的交聯(lián)聚合物,，可克服上述缺點，其物理參數(shù)可通過線性聚合物的種類,、濃度等予以調(diào)節(jié),，而且每次分離后毛細(xì)管中的篩分緩沖液都要重新更換，因此,，重現(xiàn)性很高,。
目前，無膠篩分技術(shù)已廣泛用于分離寡核甘酸,、核酸片段,、PCR產(chǎn)物，DNA測序以及分離SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物,，后者已成為鑒定蛋白質(zhì)純度和測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量的一個重要手段,。
二、實驗用品
（一）器材
（1）毛細(xì)管電泳儀,。
（2）微型離心機,。
（3）恒溫水浴鍋
（二）試劑
（1）CE-SDS蛋白樣品緩沖液,。
（2）0.1mol/L NaOH,。
（3）0.1mol/L HCL。
（4）CE-SDS蛋白電泳緩沖液,。
（5）CE-SDS內(nèi)標(biāo)（1mg/mL苯甲酸）,。
（6）CE-SDS蛋白標(biāo)準(zhǔn)：包括8種蛋白（20mg/mL）。
（三）材料
電泳純的牛血清白蛋白,、卵蛋白溶菌酶和細(xì)胞色素C,。
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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