四甘肽是從天然食品中提取的蛋白質(zhì),再經(jīng)過(guò)定向酶切及特定小肽分離技術(shù)獲得的小分子多肽物質(zhì),。四甘肽的氨基酸組成中,,支鏈氨基酸(亮氨酸,、異亮氨酸、纈氨酸)含量很高,。具有降血壓,、醒酒、護(hù)肝和增強(qiáng)免疫及增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)能力等作用,。本實(shí)驗(yàn)采用Acclaim 120 C18色譜柱,,使用磷酸鹽緩沖液對(duì)四苷肽進(jìn)行分析,分離度高,,結(jié)果可靠,。
分析譜圖見(jiàn)圖2-34。本實(shí)驗(yàn)采用MAbPac SEC-1體積排阻的色譜柱進(jìn)行分析,,人血白蛋白的拖尾因子和分離度均達(dá)到藥典要求,,按照面積歸一化法計(jì)算,人血白蛋白的多聚體,、二聚體及單體的含量與客戶(hù)提供的實(shí)際含量一致,。圖2-32 人狂犬病免疫球蛋白1a分析譜圖圖2-33 人狂犬病免疫球蛋白1b分析譜圖圖2-34 樣品含量分析譜圖圖2-31 人免疫球蛋白分析譜圖色譜柱:Acclaim 120 C18,5 µm,,4.6×250 mm,, P/N:059149流速:1.0mL/min; 柱溫:35℃進(jìn)樣量:10 µL,; 檢測(cè)方式:紫外檢測(cè)器,,波長(zhǎng)215nm。流動(dòng)相: A:磷酸鹽(11 mmol/L H3PO4 + 800 mmol/L H2O 用三乙胺調(diào)pH 2.5),; B:H3PO4調(diào)節(jié)超純水的pH到2.5,; C:乙腈;梯度條件見(jiàn)表2-21:
樣品在乙腈中的溶解度比較低,,實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)采用DMF和乙腈的混合物溶液溶解樣品,,溶解度相對(duì)較大,進(jìn)樣分析Fmoc四甘肽的含量大于98%(采用面積百分比),,后改用直接磷酸調(diào)節(jié)pH到2.5,,梯度分離Fmoc四甘肽,保留時(shí)間延長(zhǎng),,且柱效更高,,對(duì)Fmoc四甘肽的分離較好
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