藥品雜質(zhì)是反映藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)，人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議（Internat ional Conference of Harmonizition ICH）要求：表觀含量>0.1%的雜質(zhì)應(yīng)進(jìn)行定性分析,；常規(guī)的雜質(zhì)定性分析方法通常采用分離制備雜質(zhì)純品,，再進(jìn)行波譜學(xué)方法解析。
近年來,，越來越多的利用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析有關(guān)物質(zhì)的含量及定性,。但目前藥典中很多的有關(guān)物質(zhì)分析的方法，均采用非揮發(fā)性緩沖鹽,，甚至添加了離子對(duì)試劑作為流動(dòng)相,，因此不能直接進(jìn)入質(zhì)譜分析，給雜質(zhì)定性帶來了很大的挑戰(zhàn),，導(dǎo)致應(yīng)用出現(xiàn)局限性,。本方法介紹了采用柱切換二維液相色譜分離-質(zhì)譜定性的方法，來解決此類問題,，對(duì)一維上洗脫下來的雜質(zhì)等目標(biāo)化合物經(jīng)過閥切換至二維色譜柱,，在二維色譜柱上進(jìn)行除鹽后，再進(jìn)質(zhì)譜進(jìn)行定性分析,，通過質(zhì)譜裂解規(guī)律,，尋找雜質(zhì)可能產(chǎn)生的來源以及形成的機(jī)理，取得了較好的效果,。本實(shí)驗(yàn)儀器連接圖見圖2-14
頭孢地尼,，屬第3代頭孢，其結(jié)構(gòu)見圖2-13,。膠囊劑：50 mg/粒,，100 mg/粒,，由日本藤澤藥品工業(yè)公司原研，1991年日本上市,，商品名Cefzon,，1997年12月被美國(guó)上市，1999年在韓國(guó)上市,，2001年國(guó)產(chǎn)頭孢地尼獲準(zhǔn)在中國(guó)上市,。該品用于對(duì)頭孢地尼敏感的葡萄球菌屬、鏈球菌屬,、肺炎球菌,、消化鏈球菌、丙酸桿菌,、淋病奈瑟氏菌,、卡他莫拉菌、大腸埃希菌,、克雷伯菌屬,、奇異變形桿菌、普魯威登斯菌屬,、流感嗜血桿菌等菌株所引起的感染,。
一維分析柱：Acclaim 120 C18，5 µm,，4.6×150 mm,，P/N：059148；二維色譜柱：Acclaim PAII,，3 µm,，3.0×50 mm， P/N：068973MS工作參數(shù)：1） Full Scan,，ESI源,，正離子模式，M/Z: 100-600,；負(fù)離子模式：100-600,；Scan time 0.4S。2） 子離子掃描（母離子根據(jù)full scan掃描得到）：正負(fù)離子同時(shí)掃描,，F(xiàn)ull scan M/Z=100-600,，Scan time 0.2s，F(xiàn)WHM 0.70,，CE 10V,，Energy Ramp: 40eV3）調(diào)諧參數(shù)：電壓：2200 V；霧化溫度：350℃,；鞘氣壓力：35 psi,；輔助氣壓力：10 psi,；毛細(xì)管溫度：300℃。
一維分析流動(dòng)相（右泵）,，梯度程序見表2-9：流動(dòng)相A：0.25%四甲基氫氧化銨溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH=5.5）1000 mL,，加入0.l mol/L乙二胺四醋酸二鈉溶液0.4 mL；流動(dòng)相B：0.25%四甲基氫氧化銨溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH=5.5）-乙睛-甲醇=500-300-200,，加入0.1 mo1/L乙二胺四醋酸二鈉溶液0.4 mL。二維分析流動(dòng)相（左泵）,，梯度程序見表2-10：A：0.005 mol/L醋酸銨,，pH用乙酸調(diào)節(jié)至5.5；B：乙腈,。閥切換時(shí)間見表2-11,，測(cè)定譜圖見圖2-15、2-16,。柱溫：40℃,；進(jìn)樣體積：20.0 µL；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm,。
根據(jù)破壞樣品紫外譜圖,，發(fā)現(xiàn)熱破壞雜質(zhì)峰更多，因此,，選用熱破壞樣品進(jìn)行雜質(zhì)分析,。從圖可以看出，9號(hào)峰為主峰頭孢地尼,，其他峰為雜質(zhì)峰,，分別對(duì)6、7,、9,、10、12,、15號(hào)峰等進(jìn)行了閥切換,，把每個(gè)峰先切到定量環(huán)里，然后再啟動(dòng)左泵洗脫除鹽后,，進(jìn)質(zhì)譜分析,。圖2-16為質(zhì)譜上進(jìn)樣閥除鹽切換時(shí)間試驗(yàn)圖譜。從圖2-16可以看出,，上圖為負(fù)離子模式,，M-H為291.1，是EDTA鹽,；正離子模式下,，M+H 74.1為四甲基氫氧化銨鹽,，因此，要把流動(dòng)相中的鹽去除干凈,，需要找到合適的質(zhì)譜上的進(jìn)樣閥的切換時(shí)間,，把這兩個(gè)峰進(jìn)行切除，流入廢液,。在本試驗(yàn)中,，質(zhì)譜進(jìn)樣閥的切入時(shí)間約為4.0 min（以六通閥切換進(jìn)樣后開始計(jì)算）。通過該方法,，對(duì)每一個(gè)雜質(zhì)進(jìn)行單獨(dú)切換后,，通過定量環(huán)轉(zhuǎn)移至二維色譜柱上，再采用與質(zhì)譜兼容的流動(dòng)相,，把二維色譜柱上保留的鹽份去除掉,，然后把目標(biāo)化合物洗脫下來，進(jìn)質(zhì)譜分析,，該方法取得了較好的結(jié)果,，解決了相關(guān)難題，最終分析結(jié)果見下表
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