前言：反式脂肪酸（Trans Fatty Acids, 簡稱 TFA），包括單不飽 和反式脂肪酸和多不飽和反式脂肪酸,，其化學(xué)結(jié)構(gòu)分別對(duì) 應(yīng)一個(gè)或多個(gè)非共軛的雙鍵構(gòu)型,。在人工催化普通植物油 為“氫化植物油”的過程中，有一部分剩余不飽和脂肪酸 發(fā)生了“構(gòu)型轉(zhuǎn)變”,，從天然的“順式”結(jié)構(gòu)異化為“反 式”,，即為 TFA。研究表明,，大量使用含 TFA 的食物會(huì) 加速動(dòng)脈硬化,，導(dǎo)致心腦血管疾病、冠心病,、糖尿病和老 年癡呆癥等 [1],，反式脂肪酸問題在食品安全領(lǐng)域已經(jīng)引 起了全社會(huì)的廣泛關(guān)注,。 2016 年 8 月 31 日發(fā)布的 GB 5009.257-2016《食品中反式脂肪酸的測定》于 2017 年 03 月 01 日正式實(shí)施，該標(biāo)準(zhǔn)將反式脂肪酸的分析物擴(kuò) 充至 C16:1t~C22:1t,，共 15 種反式脂肪酸。
實(shí)驗(yàn)部分：試劑和儀器 質(zhì)譜儀： TSQ 8000 Evo 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（賽默飛世 爾科技,，美國）,； 氣相色譜儀： Trace 1310 氣相配TriPlus RSH 自動(dòng)進(jìn)樣器（賽 默飛世爾科技，美國）,； 色譜柱： TR-FAME (100 m * 0.25 mm * 0.20 µm) 毛細(xì)管色 譜柱（賽默飛世爾科技,，美國）； 試劑：異辛烷,、氫氧化鉀甲醇溶液
樣品前處理方法 參考 GB 5009.168-2016《食品中脂肪酸的測定》,、 GB 5009.257-2016《食品中反式脂肪酸的測定》中酯交換法 進(jìn)行樣品前處理。 儀器方法 氣相色譜 升溫程序： 150 ℃保持 1 min,，以 25 ℃ / min 升溫到 200 ℃,， 以 4 ℃ /min 升溫到 215 ℃，保持 10 min,， 再以 20 ℃ /min 升溫到 240 ℃并保持 3 min,； 載氣：氦氣， 1.0 mL/min（恒流）,； 進(jìn)樣口： 240 ℃,； 進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣（分流比： 30： 1） 進(jìn)樣量： 1 µL
結(jié)果與討論 氣相分離方法建立 待測的 15 種反式脂肪酸包含多種同分異構(gòu)體，常規(guī)分析 （GB 5009.257-2016）采用 GC-FID 配 100 m 聚二氰丙基 硅氧烷色譜柱分離,，分析時(shí)間較長（50 min） , 且 C18： 1,、 C18： 3 的多個(gè)同分異構(gòu)體無法基線分離，如圖 1 所示,。
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質(zhì)譜方法優(yōu)化 現(xiàn)今,，脂肪酸甲酯的常規(guī)檢測通常使用 GC-MS 的選擇離 子掃描（SIM）模式替代傳統(tǒng)的 GC 檢測， SIM 模式下質(zhì) 譜只掃描選定的定量（定性）離子,，能獲得較好的定性,、 定量結(jié)果。然而,，對(duì)于低濃度樣品,，尤其是復(fù)雜基質(zhì)樣品， SIM 模式無法*去除干擾,，檢測結(jié)果容易受到影響,。相 較于單四極桿 GC-MS，三重四極桿 GC-MS 可兼容多種掃 描模式,，其中 SRM 選擇離子對(duì)掃描可以通過二級(jí)質(zhì)譜的 模式采集離子對(duì)信息,，有效去除基質(zhì)干擾，提高靈敏度。 如圖 5 所示,，低濃度樣品中,， SIM 模式采集 C18:3 的基峰 79 m/z 時(shí)， RT 15.7-16.1 的四個(gè) C18:3 的同分異構(gòu)體色譜 峰響應(yīng)較差,，基線干擾嚴(yán)重,；而在 SRM 選擇離子對(duì)掃描 模式下， C18:3 無論是峰面積還是信噪比都明顯優(yōu)于 SIM 模式的結(jié)果,。另一方面,，脂肪酸甲酯的 EI 質(zhì)譜圖中豐度 較高的離子 m/z 較小（如： 41,、 55,、 69、 74 等）,，并不 是母離子的*,，但在常量分析對(duì)它們進(jìn)行選擇離子 掃描（SIM）可以獲得較好的響應(yīng)。因此,，本文在 TimedSIM 方法的基礎(chǔ)上,，采用 Timed-SRM 模式，建立了一種 靈活結(jié)合選擇離子和選擇離子對(duì)的掃描模式,，以零碰撞能 SRM 模式作常規(guī)定量分析,，同時(shí)用常規(guī) SRM 模式進(jìn)行確 證和干擾排除，大大提高分析準(zhǔn)確和靈敏度,。最終優(yōu)化出 的質(zhì)譜條件如表 1 所示,。
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結(jié)論 本方法使用賽默飛 TSQ 8000 Evo 三重四級(jí)桿氣質(zhì)聯(lián)用儀 結(jié)合 TR-FAME 脂肪酸分析專用柱，建立了一套 TimedSRM 分析 15 種反式脂肪酸甲酯的方法,，通過串聯(lián)質(zhì)譜有 效地降低基質(zhì)干擾,，提高分析的準(zhǔn)確度和靈敏度。并結(jié)合 GB 2009.257-2016《食品中反式脂肪酸的測定》中的前處 理方法,，通過乳粉樣品對(duì)方法進(jìn)行驗(yàn)證,。該方法操作簡單、 靈敏度高,、重現(xiàn)性好,，*符合對(duì)食品中反式脂肪酸的檢 測要求。
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