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新冠病毒“絕育”
德國(guó)法蘭克福大學(xué)2020年5月14日發(fā)表公告,，借助一種新型質(zhì)譜分析技術(shù),，科研人員目前已經(jīng)找到了新冠肺炎一處“弱點(diǎn)”，針對(duì)性使用抑制劑可阻止病毒的復(fù)制,，達(dá)到使新冠病毒“絕育”的目的,。
生命科學(xué)界一片沸騰，有的說(shuō)今年諾貝爾獎(jiǎng)沒(méi)跑的,，有的說(shuō)這是“*八大奇跡”的,，很多研究者非常感興趣德國(guó)科學(xué)家到底借助什么樣的新質(zhì)譜分析技術(shù)，來(lái)找到新冠“弱點(diǎn)”,，為病毒做絕育手術(shù)的,。
下面小編就來(lái)跟大家分析下該實(shí)驗(yàn)室在《自然》雜志上發(fā)表的文章，帶大家學(xué)習(xí)基于Orbitrap質(zhì)譜技術(shù)研究新冠的新思路。
該技術(shù)是由法蘭克福大學(xué)醫(yī)學(xué)病毒學(xué)研究所的Jindrich Cinatl教授和歌德大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Christian Münch教授團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)的一種新穎的多重增強(qiáng)蛋白質(zhì)動(dòng)力學(xué)(multiplexed enhanced protein dynamicsme, mePROD)方法進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析,，能夠在高時(shí)間分辨率下確定轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組的變化,，加速確證病毒致病性相關(guān)的生物途徑以及尋找潛在的藥物靶標(biāo)。
這個(gè)技術(shù)正是探索新冠的“利器”,。
接下來(lái),，小編帶你一起探索這項(xiàng)“新型質(zhì)譜技術(shù)”
01構(gòu)建細(xì)胞感染模型
想要開(kāi)展該研究的重點(diǎn)取決于兩點(diǎn)：
1. 是否有合適的允許病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)模型；2.對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行時(shí)間感染特征分析的敏感蛋白質(zhì)組學(xué)方法,。
該研究建立針對(duì)SARS-CoV-2高度兼容的細(xì)胞模型,，在病毒感染24小時(shí)后就能迅速見(jiàn)到細(xì)胞致病作用 (圖1A)。在病毒感染細(xì)胞后的2h,、6h、10h和24h,，分別用定量PCR技術(shù)測(cè)量上清液中的病毒RNA拷貝數(shù),，發(fā)現(xiàn)感染后SARS-CoV-2 RNA數(shù)量不斷增加（圖1B）。這表明模型可以用于研究細(xì)胞中SARS-CoV-2,。
圖1. SARS-CoV-2 在細(xì)胞內(nèi)快速?gòu)?fù)制模型,。A, 病毒感染24小時(shí)后的細(xì)胞形態(tài)變化; B, 細(xì)胞上清液中病毒RNA拷貝數(shù)的增加。
02翻譯抑制劑防止SARS-CoV-2病毒復(fù)制
建立好模型,，研究人員需要利用一種高效的方法確定SARS-CoV-2感染的時(shí)間分布,，這時(shí)候mePROD蛋白質(zhì)組學(xué)方法應(yīng)運(yùn)而生，即基于Orbitrap高分辨質(zhì)譜儀聯(lián)用新蛋白代謝標(biāo)記（SILAC）和串聯(lián)質(zhì)量標(biāo)簽（TMT）兩種標(biāo)記方法,，進(jìn)行蛋白差異分析,。
圖2. mePROD蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)流程
（點(diǎn)擊查看大圖）
抑制宿主翻譯先前已被用作治療MERS-CoV等多種冠狀病毒感染性疾病。與其他病毒抑制宿主蛋白的合成從而增加病毒蛋白的合成不同,，該方法挖掘數(shù)據(jù)表明SARS-CoV–2僅引起宿主翻譯能力的微小變化,，作者推測(cè)SARS-CoV-2復(fù)制可能對(duì)翻譯抑制更為敏感。通過(guò)測(cè)試了兩種翻譯抑制劑,，即環(huán)己酰亞胺（cycloheximide, 翻譯延伸抑制劑）和曲美?。╡metine, 抑制40S核糖體蛋白S14）。在無(wú)毒濃度下,，兩個(gè)化合物均對(duì)SARS-CoV-2復(fù)制產(chǎn)生了顯著抑制作用從而發(fā)現(xiàn)翻譯抑制劑是細(xì)胞中SARS-CoV-2復(fù)制的有效抑制劑,。
圖3. 環(huán)己酰亞胺和曲美汀對(duì)病毒復(fù)制的抑制作用。
（點(diǎn)擊查看大圖）
03發(fā)現(xiàn)潛在的抗病毒靶標(biāo)
重點(diǎn)來(lái)了,，通過(guò)前期蛋白質(zhì)組學(xué)大數(shù)據(jù)挖掘,，目前一張藍(lán)圖已展現(xiàn)在眼前，下一步的重中之重就是探究與病毒蛋白共同增加的宿主蛋白,，從而尋求潛在的SARS-CoV-2復(fù)制抑制劑,。
作者分析了與病毒蛋白變化趨勢(shì)相似的蛋白，在數(shù)據(jù)中富集的代謝途徑主要由不同的核酸代謝子途徑組成。基于此,，研究者測(cè)試核苷酸合成抑制劑對(duì)細(xì)胞中SARS-CoV-2復(fù)制的影響,，高達(dá)10 µM的布雷奎納（brequinar，抑制雙氫乳清酸脫氫酶并不具有抗病毒的作用,。相比之下,，低濃度下的利巴韋林（ribavirine，抑制肌苷一磷酸脫氫酶）即可抑制SARS-CoV-2復(fù)制（圖4C）,，這表明利巴韋林是可以進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)的候選藥物,。
此外，與蛋白質(zhì)折疊相關(guān)的蛋白變化與病毒蛋白質(zhì)較為一致,，p97是AAA家族的六聚體ATPase酶,，也是真核生物豐富的蛋白之一，通過(guò)調(diào)節(jié)蛋白的穩(wěn)定性來(lái)執(zhí)行一系列生物學(xué)功能,，參與膜融合,、蛋白降解等過(guò)程。測(cè)試p97的小分子抑制劑NMS–873對(duì)SARS-CoV-2復(fù)制的影響,。研究表明,，NMS–873在低納摩爾濃度下即可*抑制SARS-CoV–2（圖4D）。
圖4. 核酸代謝相關(guān)的蛋白水平與病毒基因表達(dá)相關(guān),。A, 病毒蛋白隨感染時(shí)間的變化,；B, 宿主蛋白與病毒蛋白關(guān)聯(lián)的GO分析；C, D, Ribavirin和NMS–873的抗病毒實(shí)驗(yàn),。
結(jié)論：
此項(xiàng)技術(shù)將把人類(lèi)與新冠病毒的戰(zhàn)斗帶到一個(gè)“新紀(jì)元”,。它雖然無(wú)法消滅已經(jīng)存在的病毒，但可以把病毒絕育封存在細(xì)胞內(nèi)部,。絕育后,，新冠肺炎病毒可怕的高傳染性將不復(fù)存在，且因?yàn)轶w內(nèi)病毒不再持續(xù)分裂復(fù)制,，引發(fā)并發(fā)癥的概率會(huì)減至低,，死亡率也會(huì)隨之下降。
毫無(wú)疑問(wèn),，這種病毒“絕育術(shù)”,，作為一種醫(yī)療手段很具有創(chuàng)新性。研發(fā)藥物比疫苗要快得多,，或許在疫苗到來(lái)之前,，這種方法是人類(lèi)目前可以看到希望的另一種新技術(shù)。
該實(shí)驗(yàn)室研究給病毒研究打開(kāi)了一扇新“天窗”,，在面臨新冠病毒不斷變異而手足無(wú)措時(shí),，提供新思路,。如果后續(xù)能發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的艾滋病毒，乙肝病毒的弱點(diǎn),，也可以研制出有效抑制劑來(lái)阻斷病毒的復(fù)制,，幫助到更多的患者。
參考文獻(xiàn)：
SARS-CoV-2 infected host cell proteomics revealpotential therapy targets, DOI:10.21203/rs.3.rs-17218/v1
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