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生物制藥微課堂|宿主細胞殘留蛋白分析,如何獲得更佳結果

閱讀:620      發(fā)布時間:2020-8-25
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生物制藥微課堂|宿主細胞殘留蛋白分析,,如何獲得更佳結果?

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LCMS分析方法越來越多的用于宿主細胞殘留蛋白(HCP)的分析,,HCP分析的難點見往期微信稿“生物制藥微課堂|第二期-宿主細胞殘留蛋白如何分析?”,。如何獲得優(yōu)秀的基于LC-MS的HCP分析結果? 答案將在本期分享的兩場關于HCP的LCMS分析的網(wǎng)絡講座,,每場都有詳細的樣品前處理,LCMS方法和數(shù)據(jù)處理的詳細介紹,,可謂干貨滿滿,,供有需求的老師參考。

 

Webinar 1: 

Data Visualizations for Routine Host Cell Protein Analysis by LCMS

 

講師介紹

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博士:

Andrew Williamson

賽默飛生物制藥銷售專家

Andrew Williamson博士是賽默飛生物制藥銷售專家,。在此之前,,Andrew在賽默飛公司擔任蛋白質(zhì)組學專家,此前他在曼徹斯特大學克里斯蒂醫(yī)院的蛋白質(zhì)組學實驗室工作并管理該實驗室,。在此期間,,安德魯從事了許多基于腫瘤項目的蛋白質(zhì)組學分析,研究zhi療的關鍵指標和生物標志物的發(fā)現(xiàn),。在此期間,,Andrew還與合作者合作分析了多種干細胞和癌癥樣本,包括小鼠,、人和誘導多能干細胞,。

 

講師介紹
 

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博士:

Michelle English

Protein Metrics Inc.

的成功科學家

Michelle English 博士是Protein Metrics Inc.的客戶成功科學家,在該公司,,她專注于幫助客戶使用質(zhì)譜對早期和后期產(chǎn)品表征,。在加入Protein Metrics公司之前,Michelle是輝瑞公司的一名科學家,,并在弗吉尼亞大學的Hunt實驗室工作,。

 

看點:

HCP的完整解決方案及可視化的數(shù)據(jù)展示

生物藥生產(chǎn)過程中會產(chǎn)生產(chǎn)品不需要的宿主細胞殘留蛋白(HCP),大部分HCP可以通過純化去除,。監(jiān)管指南規(guī)定在上市前必須確定生物藥中殘留的HCP水平,。LC-MS技術在過去幾年中得到了快速發(fā)展,但迄今為止該技術對分析人員專業(yè)技能要求高和需要對數(shù)據(jù)進行手工分析,。分析挑戰(zhàn)包括樣品寬動態(tài)范圍,,極低的HCP豐度,差的序列覆蓋率,等等,。此外,,假陽性和假陰性一樣危險,會造成不能重現(xiàn),,這也阻礙了LC-MS成為常規(guī)的HCP分析手段,。

 

講座關鍵點:

01.為什么LC-MS在生物藥分析中越來越常用

02.如何對非質(zhì)譜專家用戶有效的展示數(shù)據(jù)

03.如何更快提供可信的結果

 

 

該報告詳細介紹了樣品前處理方法、LC-MS方法和數(shù)據(jù)處理,。非變性SMART Digest酶解能去除大部分主成分,,提高HCP鑒定的數(shù)目。高靈敏度和采集速度快的Orbitrap Exploris 480 質(zhì)譜儀進一步提高HCP鑒定數(shù)目,,并且重現(xiàn)性好,。軟件Proteome Discoverer和Protein metrics用于數(shù)據(jù)的分析,得到可視化好的HCP鑒定和相對定量的結果和報告,。

流程化的數(shù)據(jù)處理

(點擊查看大圖)


 

Webinar 2: 

A Data-Independent Acquisition (DIA) library based approach for Host cell protein analysis on the Thermo Scientific Orbitrap platform


講師介紹
 

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博士:

Ian Anderson

賽默飛生物制藥銷售專家

Ian Anderson博士在Allergan工作了6年多,,專注于從抗體到基因zhi療載體等多種生物制藥產(chǎn)品的質(zhì)譜鑒定。在此之前,,他在SGS-M-Scan工作,,開發(fā)用于表征生物藥品和生物仿制藥的新型質(zhì)譜方法。

 

看點:

基于DIA采集模式的HCP分析

現(xiàn)在用于HCP分析方法,,絕大部分用的是數(shù)據(jù)依賴性采集(DDA)的方法,。數(shù)據(jù)非依賴性采集(DIA)與DDA相比,不丟失任何信息,、靈敏度更高,,適合用于HCP分析。該報告講解了基于Thermo Scientific Orbitrap Fusion Lumos三合一質(zhì)譜儀Orbitrap Exploris 480質(zhì)譜儀開發(fā)HCP的DIA方法,,以及如何在兩個質(zhì)譜系統(tǒng)設置合適參數(shù),。該報告將詳細介紹好的HCP數(shù)據(jù)庫如何建立以及構建該庫的zui佳方式,并列舉了如何在生物制藥過程開發(fā)中使用該方法的例子,。

 

講座關鍵點:

01.討論基于高分辨質(zhì)譜平臺的HCP分析方法

02.演示使用DIA方法進行HCP的分析

03.該方法在生物制藥開發(fā)過程中應用

DIA分析LCMS平臺

 

本報告詳細介紹了DIA采集模式用于HCP分析的方法建立,。DDA是好的建立譜圖庫的數(shù)據(jù)采集模式,數(shù)據(jù)不丟失,、高靈敏度的DIA采集的數(shù)據(jù)可以檢索該譜圖庫從而得到可信的HCP鑒定結果,。本報告對DDA和DIA的質(zhì)譜參數(shù)設置進行了詳細的解讀,且該方法可以在Orbitrap Fusion Lumos三合一質(zhì)譜儀和Orbitrap Exploris 480質(zhì)譜儀相互轉(zhuǎn)移,,表明該方法的穩(wěn)健性好,、重復性好。

DIA 用于HCP分析的實驗流程

(點擊查看大圖)


使用Orbitrap高分辨質(zhì)譜平臺Exploris 480和Orbitrap Fusion Lumos,,能夠?qū)崿F(xiàn)鑒定靈敏度及動態(tài)范圍的進一步提高,。那么如何進行合理的實驗設計,?質(zhì)譜方法的參數(shù)設置?鑒定結果可做到什么程度,?這些問題都會在以上報告中給出答案,,精彩不要錯過!

 

 

文末福利:

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