摘 要：以甲醇為溶劑，采用賽默飛ASE加速溶劑萃取儀,、高壓萃取魚肉中喹乙醇，并實(shí)施了自動 在線凈化過濾,，色譜分析采用了乙醇(色譜級)為流動相，超快速液相色譜法進(jìn) 行分析,。喹乙醇的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的線性回歸方程為Y=0．0358x+0．0019,，相關(guān) 系數(shù)r=0．9999,，線性范圍為O．1～2．0¨g／mL，方法檢出限(以信噪比(s／N=3) 計(jì)算)為5．0斗g／kg,，樣品加標(biāo)回收率平均值(n=3)為88％,，同時(shí)對6個(gè)平行樣 進(jìn)行精密度試驗(yàn)，保留時(shí)間與峰面積的RSD值分別為0．21％和2．0％,，重現(xiàn)性 較好。方法可以用來快速分析魚肉等樣品中的喹乙醇,。 關(guān)鍵詞：快速溶劑萃??；超液相色譜；喹乙醇,；魚肉
喹乙醇(Olaquindox)又名喹酰胺醇,，屬喹惡 啉1,，4一二氧化物類藥物，是一種畜禽及水產(chǎn)動 物促生長的藥物添加劑,，具有抗菌和促生長作 用,，常被用來添加在飼料中，用于促進(jìn)禽畜類的 生長,。但過量使用或不正當(dāng)使用，會導(dǎo)致喹乙醇 在肉制品中殘留,，在被人食用后，會對人體產(chǎn)生 影響,，毒理實(shí)驗(yàn)研究表明,，喹乙醇具光敏毒性,、致 畸性和致癌性…。目前,，常用的分析檢測方法是 采用超聲或振蕩提取后凈化,、過柱嵋J，利用反相 液相色譜法分析,。前處理提取溶劑通常為乙腈,， 提取后，用正己烷去除油脂,，然后,，旋蒸、離心,、過 濾,，定容，待上液相色譜儀進(jìn)行分離,、定量,。色譜 分析條件常采用甲醇或乙腈作為流動相，C18分 離柱,，7—8 min分析完畢H1。
本文前處理采用了快速溶劑(ASE)進(jìn)行加溫,、 加壓萃取，大大縮短了提取時(shí)間,，提高了提取效率,， 并增加了自動在線凈化、過濾等步驟,，縮減了提取 時(shí)間和溶劑消耗,，減少了超聲提取后后期帶來的繁 瑣手工操作。同時(shí),，上機(jī)分析采用乙醇為流動相超 液相色譜法進(jìn)行分析,，目標(biāo)化合物在1．5 min 出峰，3 min內(nèi)分析完畢,，一方面大大節(jié)省了整個(gè)分析時(shí)間,，另一方面也減少了乙腈等有毒溶劑的 用量M1。
l 實(shí)驗(yàn)部分
1．1試劑與材料 甲醇,、乙醇,、正乙烷(色譜純)；硅藻土(Dionex 公司)：將硅藻土(75～150斗m)放入馬福爐,，于 550,。C灼燒3 h，移至干燥器中冷卻,，裝入密封容器 保存,。中性氧化鋁：將中性氧化鋁(75～150 pan) 放人馬福爐，于550℃灼燒3 h,。移至干燥器中冷 卻,，裝入密封容器保存。喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)儲備液,。其他 所用試劑未特別注明均為分析純,。實(shí)驗(yàn)用水均為 超純水。
1．2儀器與設(shè)備 ASE350快速溶劑萃取儀(Dionex公司)：萃取 凈化條件見表l,。 超液相色譜儀(Dionex UPLC Ultimate 3000)，液相色譜條件：色譜柱：Acclaim PA2(C18,， 2．21zm,，2．1×50 IDJn)；流動相：乙醇／lO mmoL乙 酸銨(10／90),，O．4 mI．／min,，等度；色譜柱溫度： 60℃,；檢波長：380nm,；進(jìn)樣量：l燦。 ．
1．3實(shí)驗(yàn)方法 標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制：準(zhǔn)確稱取適量的喹乙醇標(biāo)準(zhǔn) 品,，用5％甲醇溶液配成濃度約1 ms／mL的標(biāo)準(zhǔn)儲 備液,。如喹乙醇不溶，可超聲使其溶解,。喹乙醇標(biāo) 準(zhǔn)工作液：將儲備液用5％甲醇溶液稀釋為含喹乙 醇0．1—2．0斗g／mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液,，存放在冰箱 中,，避光保存。
樣品前處理：將魚去除魚鱗和骨頭,，取出魚肉 用勻漿機(jī)打碎,，取5．09左右，加人助濾劑5．09,，混 和后,，再加入5．Og中性氧化鋁，放入到快速溶劑萃 取儀22 mL萃取池中,，萃取池底部加入一片纖維素 濾膜,。按“1．2”中萃取條件經(jīng)自動萃取凈化后，將 萃取液旋轉(zhuǎn)至近干,，用流動相定容,，過0．221LLm針 孔濾膜待上機(jī)使用。
2結(jié)果與討論
2．1 ASE萃取凈化條件選擇 肉制品或飼料中喹乙醇的提取,，通常采用乙 腈超聲或振蕩提取,，提取后，一般采用HLB固相 萃取小柱凈化喹乙醇試樣提取液"J,，或采用自制 的填充的中性氧化鋁小柱,，過柱凈化№】。前者使 用HLB SPE小柱,，導(dǎo)致分析成本大大增加,，且增 加了分析時(shí)間；后者,，由于采用自制填充的小柱 等過柱裝置,，重現(xiàn)性與回收率不能得到很好的保 證，且給實(shí)驗(yàn)室環(huán)境帶來一定的污染,。因此本文 采用了ASE密閉加溫加壓提取"．8 J,，為了避免大 量使用乙腈，本文采用了乙醇與甲醇進(jìn)行替代試 驗(yàn),，進(jìn)行了嘗試性分析,。按照“1．2”方法對樣品 進(jìn)行了提取與在線凈化，整個(gè)時(shí)間縮短至15 rain,，提取用試劑(乙醇或甲醇)減少至55 mL,，凈 化用正巴烷減少至25 mL。通過提取后回收率比 較發(fā)現(xiàn),，使用甲醇提取效率要高于乙醇,，達(dá) 到88％。
2．2色譜條件選擇 參照國標(biāo)及相關(guān)文獻(xiàn)方法【3],，本文采用了乙 醇和水為流動相H J,，采用UHPLC與亞微米粒徑細(xì) 徑柱進(jìn)行了分析,，柱溫選擇了60℃。選用乙醇代 替甲醇或乙腈作為流動相,，為了達(dá)到色譜的概 念，減少有毒試劑的使用,。但乙醇的粘度較大,，為 了降低柱壓,，及達(dá)到快速分離的效果，后把柱溫 增加到了60℃,，從分離效果來看，與甲醇類似,，但 峰寬相對變寬。另外,，由于該方法有機(jī)相比例為 10％，因此,，為了保護(hù)色譜柱，選用了更親水的C18 柱一PA2柱,，相對普通C18柱,，PA2柱上喹乙醇出峰 時(shí)間更快，峰形更對稱,。
2．3標(biāo)準(zhǔn)溶液分析 按照“1．2”提取方法與“1．3”分析條件,，標(biāo)準(zhǔn) 溶液色譜圖見圖1。對標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行線性回 歸分析,，以峰面積Y對濃度髫(斗g／mL)進(jìn)行回歸 計(jì)算,，得到線性回歸方程為Y=0．0358x+ 0．0019，相關(guān)系數(shù)r=0．9999,，線性范圍為0．1～ 2．0斗g／mL,。以信噪比(S／N=3)計(jì)算方法檢出限 為5．ows／kg。
2．4精密度考察 將空白樣品添加喹乙醇至終濃度為 0．5斗g／mL,，做6個(gè)平行樣,，進(jìn)行變異性統(tǒng)計(jì)分析， 結(jié)果表明：喹乙醇保留時(shí)間的變異系數(shù)為0．21％,， 峰面積的變異系數(shù)為2．0％,，鶯現(xiàn)性較好,。
2．5樣品測定及加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn) 按照“1．3”節(jié)實(shí)驗(yàn)方法，對樣品進(jìn)行前處理并 分析測定,，采用峰面積外標(biāo)法定量,。同時(shí)，為檢驗(yàn) 方法的準(zhǔn)確性,，作了3個(gè)加標(biāo)回收試驗(yàn),。結(jié)果表 明：樣品中未檢出目標(biāo)化合物喹乙醇，通過3個(gè)加 標(biāo)回收試驗(yàn),，平均回收率為87．9％,，加標(biāo)回收譜圖 見圖2，分析結(jié)果見表2,。
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