制備色譜

蘭博工業(yè)制備色譜主要特點(diǎn)：
1.雙泵可作梯度洗脫
2.可兼作梯度分析 
3.操作簡單,，檢測靈敏度高,，穩(wěn)定性好 
4.長期免維護(hù)運(yùn)行 
5.兼容性好 


    制備色譜是一種非常實(shí)用的用于少量樣品純化的技術(shù)。制備色譜可以快速分離反應(yīng)體系混合物中的多種組分,，因此對(duì)于獲得試驗(yàn)反應(yīng)產(chǎn)物或天然提取物組分的分離尤其有用,。

    制備色譜操作流程：上樣--展開--檢測--刮板--洗脫

    樣品要求：因?yàn)楣枘z板是弱酸性的，對(duì)酸不穩(wěn)定的化合物盡量避免爬大板,；對(duì)空氣,，水，有機(jī)溶劑穩(wěn)定,； 低沸點(diǎn)的溶劑里要好溶,；最好有紫外吸收；極性不能太大（至少展開劑能爬起來）,。

    上樣：盡量少的溶劑溶解樣品,，最好是易揮發(fā)的，二氯甲烷常用,，如果不溶可以加幾滴甲醇促溶,。可以用一次性滴管塞棉花后剪成毛筆狀上樣,，每個(gè)人的辦法都不同,，小編就是這么弄的，順便練練毛筆字,。上樣時(shí)也最好像寫毛筆字一樣一氣呵成,，這樣跑出來的帶比較均勻。如樣品溶液太多需要上兩遍樣,，先用吹風(fēng)機(jī)吹干溶劑后再上樣,。通常情況下， 每塊20X20的大板上樣量：40-60mg; 如果反應(yīng)比較雜的話,，可適當(dāng)減少上樣量,；上樣的樣品帶距離兩端大約1cm, 距離底邊大約2-3cm，總之控制樣品帶的高度一定要高于展開缸中展開劑的高度,。

    展開：展開之前，一定將溶劑吹干或晾干,，否則會(huì)導(dǎo)致色帶的形狀不規(guī)則,。展開劑的選擇,，先用小板爬樣，具體怎么爬小板,，請(qǐng)回看往期文章（ TLC薄層層析技術(shù) ）,，選到合適的展開劑后，配好溶劑爬大板,，由于大板和小板由細(xì)微的差別,，大板展開劑的極性可以稍微比小板展開劑的極性大一點(diǎn)，一樣的話也問題不大,。跑板最好要跑到快頂端1cm左右,，充分展開樣品，切記不要跑過,，跑過的話,，極性小的點(diǎn)可能會(huì)被展開劑沖都一起，而極性大的點(diǎn)雖然不會(huì)沖到上面,，但會(huì)變散,，不容易判斷色帶的邊緣。

    另外,，如果上樣的色帶較寬或者不規(guī)則,，可以在展開之前提前利用大極性溶劑預(yù)展開2-3cm，將寬色帶壓縮成窄帶,，然后拿出來重新吹干,，然后再正常展開。

    展開時(shí),，和爬小板類似,，要保持展缸內(nèi)較高的蒸汽壓，最好用重物壓緊展缸蓋,。如果展缸有裂紋的話,，二氯甲烷甲醇體系千萬不要用，石油醚乙酸乙酯體系可以考慮,，總之效果都不好,。

    如果一次展開后，發(fā)現(xiàn)分離效果不佳,，可以考慮吹干后重復(fù)展開,。

    檢測：產(chǎn)品的判斷，通過極性大致判斷哪幾個(gè)色帶可能是產(chǎn)品,，然后每個(gè)色帶可以先刮一點(diǎn),，碾碎，加甲醇溶解,，過濾送LCMS檢測判斷,。

    能爬大板的樣品一般是有紫外吸收的化合物,，這樣可以準(zhǔn)確判斷產(chǎn)物的準(zhǔn)確位置并取得較好的純化效果。沒有紫外吸收的化合物也可以爬大板,，但是得到產(chǎn)物的純度全靠運(yùn)氣了,！建議使用微量柱層析純化【 25mg的樣品如何柱層析？ 】,。無紫外吸收的樣品可以參照以下方法盲刮,，我們將制備板的一側(cè)進(jìn)行部分顯色，活用玻璃刀將TLC板分割下小部分,，通過部分的顯色情況,，來反推整塊板的顯色情況，所以相對(duì)的對(duì)板的展開效果的要求比較高,，如果爬的色帶不規(guī)則,，那很難得到純的產(chǎn)物。

    其實(shí)不用切割下來,，也可以顯色,，利用滴管在板邊緣涂顯色劑，然后顯色,，效果也可以,。

    產(chǎn)物色帶的判斷： 如果有標(biāo)樣點(diǎn)的話，可以跟標(biāo)樣點(diǎn)TLC檢測對(duì)照,；如果沒有標(biāo)樣點(diǎn)的話可以將TLC—LCMS或NMR組合判斷,；有時(shí)在大板展開后，可能會(huì)出現(xiàn)像下方第3塊板的情況,，兩條色帶距離特別近,，不好判別是不是一個(gè)東西，造成這種狀況的原因可能是過載或受潮,，建議大家將兩條色帶分別刮取后與標(biāo)點(diǎn)對(duì)照來展開判斷是不是一個(gè)東西,，再確定能不能合并。
    刮板：判斷好色帶后,，在紫外燈下,，用鉛筆描好熒光帶，開始刮板,。 帶好口罩很重要,，小編是用平頭雕刻筆刀刮板的，非常好用,。另外非常重要的是,，在確定得到所需產(chǎn)物之前，不要輕易丟棄制備板,。

    洗脫：刮好的硅膠,，量少的話,，可以隔著稱量紙用試管搟碎。量多的話,，直接裝到自封袋里面隨便蹂躪，直到成粉末為止,。粉末狀的硅膠樣品的洗脫,，大部分人是直接加溶劑泡出來。但小編用的是,，把硅膠粉直接裝到柱子（有底層砂芯的那種）里,，上層鋪一薄薄的石英砂，直接像過柱子一樣在上層加溶劑壓出來,，這種方法的好處就是,，對(duì)于溶解性不好的樣品也可以 用相對(duì)較少的溶劑洗快速洗出產(chǎn)品。加入溶劑洗脫的時(shí)候可以隨時(shí)點(diǎn)板看產(chǎn)品是否已經(jīng)*洗出,。 盡量選擇溶解度好并且極性小的溶劑,，通常可用二氯甲烷或者乙酸乙酯,，如果化合物溶解度較差時(shí),，也可選用二氯甲烷：甲醇10：1的混合溶劑進(jìn)行洗脫，防止溶解過多硅膠,，洗脫劑避免加入過多的甲醇,。

制備色譜