2010版藥典 黃曲霉毒素檢驗法（文字版）

附錄Ⅸ V 黃曲霉毒素測定法

    本法系用液相色譜法(附錄ⅥD)側(cè)定藥材 飲片劑制劑中的黃曲霉毒素(以黃曲霉毒B₁,、黃曲霉毒索B₂,、黃曲霉毒素G₁和黃曲霉毒素G₂總量計），除另有規(guī)定外,，按下列方法測定。

     色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水(10：18：42)為流動相,，流速每分鐘0.8ml；采用柱后衍生法檢測,。衍生溶液為0.05%的碘溶液（取碘0.5g,，加人甲醇100ml使溶解，用誰稀釋至1000ml制成）,，衍生化泵流速每掙鐘0.3ml衍生化溫度70℃,；以熒光檢測器檢測,，激發(fā)波長λex=360nm(或365nm）,，發(fā)射波長λem=450nm。兩個相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5,。

     混合對照品溶液的制備 精密量取黃曲霉毒素混和標(biāo)準(zhǔn)品（黃曲霉毒B₁,、黃曲霉毒索B₂、黃曲霉毒素G₁,、黃曲霉毒素G₂標(biāo)示濃度分別為1.0ug/ml,、0.3ug/ml、1.0ug/ml,、0.3ug/ml）0.5ml,，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度,，作為儲備液,。精密量取儲備液1ml，置25ml量瓶中,，用甲醇稀釋至刻度,，即得,。

     供試品溶液的制備 取供試品粉末約15g（過二號篩）,，精密稱定,，加氯化鈉3g,，置于均質(zhì)瓶中,，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速攪拌2分鐘（攪拌速度大于11000轉(zhuǎn)/分鐘）,，離心5分鐘（離心速度2500轉(zhuǎn)/分鐘）,，精密量取上清液15ml,，置50ml量瓶中,，用水稀釋至刻度，搖勻,，用微孔濾膜（0.45um）濾過,，量取續(xù)濾液20.0ml，通過免疫親和柱（AflaT-est@P）,，流速每分鐘3ml,，用水20ml洗脫，洗脫液棄去,，使空氣進入柱子,，將水?dāng)D出柱子,，再用適量甲醇洗脫,，收集洗脫液，置2ml量瓶中,，并用甲醇稀釋至刻度,，搖勻。即得,。

     測定法   分別精密吸取上述混和對照品溶液5ul,、10ul、15ul,、20ul,、25ul，諸如 液相色譜儀,，測定峰面積,，以峰面積為縱坐標(biāo)，進樣量為橫坐標(biāo),，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，另精密吸取上述供試品溶液20-25ul，注入液相色譜儀,，測定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品中相當(dāng)于黃曲霉毒素B₁,、黃曲霉毒索B₂,、黃曲霉毒素G₁、黃曲霉毒素G₂的量,，計算,，即得,。

     【附注】 （1）本實驗應(yīng)有相應(yīng)的安全、防護措施,，并不得污染環(huán)境,。

（2）殘留有黃曲霉毒素的廢液或廢渣的玻璃器皿，應(yīng)置于貯存容器（裝有10%次氯酸鈉溶液）內(nèi),，浸泡24小時以上,，再用清水將玻璃器皿沖洗干凈。

天津蘭博實驗儀器設(shè)備有限公司關(guān)注食品安全