制備液相色譜技術(shù)

     液相色譜技術(shù)自發(fā)明以來,，由于其,、高靈敏度等特點(diǎn)，得到了飛速發(fā)展,。近年來,，伴隨著生物技術(shù)和精細(xì)化工的發(fā)展，作為液相色譜分支的制備液相色譜也日益受到重視,，成為了生物技術(shù)產(chǎn)品和研究中*的手段。

     制備液相色譜按照一次進(jìn)樣量的多少,，可以分為3種規(guī)模,，即半制備色譜、制備色譜和工業(yè)級(jí)色譜,，如表1所示,。制備色譜以生產(chǎn)純物質(zhì)為目的，在經(jīng)濟(jì)合理的前提下,，規(guī)模越大越好,。

表1 制備型HPLC3種規(guī)模

     分析色譜與制備色譜的根本區(qū)別在于分離目的不同。分析色譜,，反映的是樣品的組成,，追求的是分離和高靈敏度，不需要收集特定的餾分,，洗脫液通常作為廢液來處理,。但在制備色譜中,，為了節(jié)省投資和操作費(fèi)用，必須以zui少的時(shí)間生產(chǎn)zui大量的產(chǎn)品,。由于目的不同,，制備色譜與分析色譜所選用的操作參數(shù)，包括色譜柱尺寸,、填料,、流量、操作壓力,、進(jìn)樣量,、產(chǎn)品純度、產(chǎn)品回收率,、色譜分離效果等的優(yōu)化上有較大的差別,。前者要求進(jìn)樣量越小越好，而后者為了提高制備量,，柱子必須超載,。柱子的超載方式有兩種，一種是 “質(zhì)量超載”,，即維持較小的進(jìn)樣體積,，提高進(jìn)樣濃度；另一種是 “體積超載”,，即保持較小的進(jìn)樣濃度,，增加進(jìn)樣體積。在制備色譜中,，一般認(rèn)為采用質(zhì)量超載的方式較好,。在制備色譜分離過程中，分離度和柱效均隨著質(zhì)量超載程度的增加而下降,。但是,，在分離度可以滿足要求的前提下，采用質(zhì)量超載的方式操作,，可以提高制備量,。

      目前，主要通過線性放大的原理優(yōu)化從分析到制備過程的操作參數(shù),。通常假設(shè)分析色譜系統(tǒng)和制備色譜系統(tǒng)的化學(xué)性質(zhì),、傳質(zhì)過程都保持不變，分析型液相色譜的進(jìn)樣量,、流量,、收集體積等乘以線性放大系數(shù)便可得制備型液相色譜的相應(yīng)參數(shù)。線性放大系數(shù)即為制備色譜柱和分析色譜柱的截面積之比與柱長(zhǎng)之比的乘積,。例如,，制備液相的進(jìn)樣量計(jì)算公式為：

Q2=Q1·(r2/r1)2·L2/L1

其中,，Q1、r1,、L1分別為分析型液相色譜的進(jìn)樣量,、色譜柱半徑和柱長(zhǎng)；Q2,、r2,、L2分別為制備型液相色譜的進(jìn)樣量、色譜柱半徑和柱長(zhǎng),。

     利用線性放大的方法優(yōu)化分析型色譜的操作參數(shù),，直接將其應(yīng)用到直徑更大的制備型色譜柱，不僅可縮短整個(gè)方法開發(fā)的時(shí)間,，并且可以減少樣品損失,，實(shí)現(xiàn)zui有效,、zui快速的分離效果,。

     目前制備液相色譜技術(shù)已廣泛地應(yīng)用于制藥,，化工和生物工程等領(lǐng)域中樣品的分離和純化,。隨著色譜理論逐漸完善,，新技術(shù)不斷出現(xiàn),，制備色譜顯示出廣闊的應(yīng)用前景,。