一、如何選擇液相色譜柱,，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇,。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇,，必須對(duì)此有一定的認(rèn)識(shí)和了解,。
1、正相色譜正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）,，以及其他具有極性官能團(tuán)，如胺基團(tuán)（NH2,APS）和氰基團(tuán)（CN,，CPS）的鍵合相填料,。由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他團(tuán)的極性較強(qiáng)，因此,，分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小,，即極性強(qiáng)弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低,，如：正乙烷（Hexane）,氯仿（Chloroform）,二氯甲烷（MethyleneChloride）等,。
2、反相色譜反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ),，表面鍵合有極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)的鍵合相,。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水,，緩沖液與甲醇,，已腈等混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)組合zui先被沖出,，而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留,。常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）,、C4（B）,、C6H5（Phenyl）等。

二、聚合物填料聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,，其主要優(yōu)點(diǎn)是在PH值為1～14均可使用,。相對(duì)與硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性;大孔的聚合物填料對(duì)蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?，F(xiàn)在的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對(duì)硅膠基質(zhì)填料,，色譜柱柱效較低。

三,、其他無機(jī)填料其它HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化,。由于其特殊的性質(zhì)，一般于特殊的用途,。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料,。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ),，不再需其它的表面改性,，該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)，石墨化碳可用于分離某些幾何導(dǎo)構(gòu)體,，又由于HPLC流動(dòng)相中不會(huì)被溶解,，這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可用于HPLC,，氧化鋁微粒剛性強(qiáng),，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點(diǎn)是可在PH高達(dá)12的流動(dòng)相中使用,。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強(qiáng),，應(yīng)用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應(yīng)用,，新型氧化鋯填料也可用于HPLC,，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應(yīng)用PH范圍1～14,，溫度可達(dá)100℃,。由于氧化鋯填料幾年才開始研究，加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度,，其重要用途與優(yōu)勢(shì)尚在進(jìn)行中,。
怎樣選擇填料粒度目前，商品化的色譜料粒度從1um到超過30um均有銷售,，而目前分析分離主要用3um,、5um和10um填料，填料的粒度主要影響填充柱的兩個(gè)參數(shù),，即柱效和背壓,。粒度越小,，填充柱的柱效越高;小于3um的填料應(yīng)用，在相同選擇性條件下,，提高柱效可提高分離度,，但不是*的因素。如果固定相選擇是正確,，但是分離度不夠,，那么選擇更小粒度的填料是很有用的，3um填料填充柱的柱數(shù)比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,，3um的色相譜的背壓卻是5um的2倍,。與此同時(shí)，柱效提高意味著在相同條件下可以選擇更短的色譜柱,，以縮短分析時(shí)間,，另外，可以采用低粘度的溶劑做流動(dòng)相或增加色譜柱的使用溫度,，比如用乙腈代替甲醇,，以降低色譜柱的壓力。

Hamilton提供的一系列聚合物基質(zhì)的HPLC色譜柱,，廣泛應(yīng)用于分析生物分子的反相,、離子交換和離子色譜中。這一系列的色譜柱適用于多種流動(dòng)相和極寬的PH范圍,，并且能避免在不能使用硅膠基質(zhì)色譜柱分析的操作條件下正常應(yīng)用,。