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液相色譜儀常用哪些檢測(cè)器,?
1.紫外可見(jiàn)吸收檢測(cè)器
紫外可見(jiàn)吸收檢測(cè)器是HPLC中應(yīng)用zui廣泛的檢測(cè)器之一,,幾乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測(cè)器。其特點(diǎn)是靈敏度較高,,線性范圍寬,,噪聲低,適用于梯度洗脫,,對(duì)強(qiáng)吸收物質(zhì)檢測(cè)限可達(dá)1ng,,檢測(cè)后不破壞樣品,可用于制備,,并能與任何檢測(cè)器串聯(lián)使用,。紫外可見(jiàn)檢測(cè)器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計(jì)相似,實(shí)際上就是裝有流動(dòng)地的紫外可見(jiàn)光度計(jì),。
(1)紫外吸收檢測(cè)器
紫外吸收檢測(cè)器常用氘燈作光源,,氘燈則發(fā)射出紫外-可見(jiàn)區(qū)范圍的連續(xù)波長(zhǎng),并安裝一個(gè)光柵型單色器,,其波長(zhǎng)選擇范圍寬(190nm~800nm),。它有兩個(gè)流通池,一個(gè)作參比,,一個(gè)作測(cè)量用,,光源發(fā)出的紫外光照射到流通池上,若兩流通池都通過(guò)純的均勻溶劑,,則它們?cè)谧贤獠ㄩL(zhǎng)下幾乎無(wú)吸收,,光電管上接受到的輻射強(qiáng)度相等,,無(wú)信號(hào)輸出。當(dāng)組分進(jìn)入測(cè)量池時(shí),,吸收一定的紫外光,,使兩光電管接受到的輻射強(qiáng)度不等,這時(shí)有信號(hào)輸出,,輸出信號(hào)大小與組分濃度有關(guān),。
缺點(diǎn):流動(dòng)相的選擇受到一定限制,即具有一定紫外吸收的溶劑不能做流動(dòng)相,,每種溶劑都有截止波長(zhǎng),,當(dāng)小于該截止波長(zhǎng)的紫外光通過(guò)溶劑時(shí),溶劑的透光率降至10%以下,,因此,,紫外吸收檢測(cè)器的工作波長(zhǎng)不能小于溶劑的截止波長(zhǎng)。
(2)光電二極管陣列檢測(cè)器
也稱(chēng)快速掃描紫外可見(jiàn)分光檢測(cè)器,,是一種新型的光吸收式檢測(cè)器,。它采用光電二極管陣列作為檢測(cè)元件,構(gòu)成多通道并行工作,,同時(shí)檢測(cè)由光柵分光,,再入射到陣列式接收器上的全部波長(zhǎng)的光信號(hào),然后對(duì)二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù),,得到吸收值(A)是保留時(shí)間(tR)和波長(zhǎng)(l)函數(shù)的三維色譜光譜圖,。由此可及時(shí)觀察與每一組分的色譜圖相應(yīng)的光譜數(shù)據(jù),從而迅速?zèng)Q定具有*選擇性和靈敏度的波長(zhǎng),。
單光束二極管陣列檢測(cè)器,,光源發(fā)出的光先通過(guò)檢測(cè)池,透射光由全息光柵色散成多色光,,射到陣列元件上,,使所有波長(zhǎng)的光在接收器上同時(shí)被檢測(cè)。陣列式接收器上的光信號(hào)用電子學(xué)的方法快速掃描提取出來(lái),,每幅圖象僅需要10ms,,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)色譜流出峰的速度,,因此可隨峰掃描,。
2.熒光檢測(cè)器
熒光檢測(cè)器是一種高靈敏度、有選擇性的檢測(cè)器,,可檢測(cè)能產(chǎn)生熒光的化合物,。某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過(guò)化學(xué)衍生化生成熒光衍生物,再進(jìn)行熒光檢測(cè),。其zui小檢測(cè)濃度可達(dá)0.1ng/ml,,適用于痕量分析,;一般情況下熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外檢測(cè)器約高2個(gè)數(shù)量級(jí),但其線性范圍不如紫外檢測(cè)器寬,。近年來(lái),,采用激光作為熒光檢測(cè)器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器極大地增強(qiáng)了熒光檢測(cè)的信噪比,因而具有很高的靈敏度,,在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用,。
3.示差折光檢測(cè)器
示差折光檢測(cè)器是一種濃度型通用檢測(cè)器,對(duì)所有溶質(zhì)都有響應(yīng),,某些不能用選擇性檢測(cè)器檢測(cè)的組分,,如高分子化合物、糖類(lèi),、脂肪烷烴等,,可用示差檢測(cè)器檢測(cè)。示差檢測(cè)器是基于連續(xù)測(cè)定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來(lái)測(cè)定樣品含量的,。光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí),,由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會(huì)產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動(dòng)相的折光指數(shù)不同,,就可被檢測(cè),,二者相差愈大,靈敏度愈高,,在一定濃度范圍內(nèi)檢測(cè)器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比,。
4.電化學(xué)檢測(cè)器
電化學(xué)檢測(cè)器主要有安培、極譜,、庫(kù)侖,、電位、電導(dǎo)等檢測(cè)器,,屬選擇性檢測(cè)器,,可檢測(cè)具有電活性的化合物。目前它已在各種無(wú)機(jī)和有機(jī)陰陽(yáng)離子,、生物組織和體液的代謝物,、食品添加劑、環(huán)境污染物,、生化制品,、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測(cè)定中獲得了廣泛的應(yīng)用。其中,,電導(dǎo)檢測(cè)器在離子色譜中應(yīng)用zui多,。
電化學(xué)檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是:
①靈敏度高,zui小檢測(cè)量~般為ng級(jí),,有目可達(dá)pg級(jí),;
②選擇性好,,可測(cè)定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì);
③線性范圍寬,,一般為4~5個(gè)數(shù)量級(jí),;
④設(shè)備簡(jiǎn)單,成本較低,;
⑤易于自動(dòng)操作,。
5.化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器
化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種快速、靈敏的新型檢測(cè)器,,因其設(shè)備簡(jiǎn)單,、價(jià)廉、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn),。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng),,生成處于激發(fā)態(tài)勢(shì)反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物,當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí),,就發(fā)射出光子,。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來(lái)自化學(xué)反應(yīng),故叫作化學(xué)發(fā)光,。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來(lái)后,,立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合,引起化學(xué)反應(yīng),,導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射,,其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比。
這種檢測(cè)器不需要光源,,也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng),,只要有恒流泵,將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中,,使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光,,通過(guò)光電倍增管將光信號(hào)變成電信號(hào),就可進(jìn)行檢測(cè),。這種檢測(cè)器的zui小檢出量可達(dá)10-12g,。