高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器,、泵,、進(jìn)樣器,、色譜柱、檢測(cè)器,、記錄儀等幾部分組成,。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi),，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程,，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí),，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。

　　高效液相色譜儀的操作步驟：

　　1,、色譜柱它包括空柱和填料,。空柱是內(nèi)壁拋光的不銹鋼管,，內(nèi)徑為4～5mm,，長(zhǎng)100～250mm。按氣相色譜法中洗滌空柱的方法洗凈,，用勻漿法填充固定相,。將此柱裝入儀器的管路中，用柱式機(jī)械往復(fù)泵輸入新鮮脫氣的流動(dòng)相,。等基線平直后可用苯,、萘、菲的混合試液,，用正己烷或甲醇：水為流動(dòng)相測(cè)定柱效及分離度塔板數(shù)在2～3萬(wàn)/ml以上及分離度在1.5以上者,，柱效好。

　　為防止柱污染,，常用1個(gè)50mm長(zhǎng),，4~5mm內(nèi)徑，裝有硅膠或立柱相同填料的保護(hù)柱接在主柱之前,，以延長(zhǎng)色譜柱的壽命,。反相鍵合相柱用畢。必須用水充分流經(jīng),，以洗去鹽類(lèi),、酸堿等雜質(zhì)防止柱生銹及填料中雜質(zhì)的積聚，再用甲醇流經(jīng)洗滌使色譜柱獲得再生,。

　　2,、流動(dòng)相的洗脫方式配好經(jīng)脫氣的流動(dòng)相放于貯液瓶中，經(jīng)過(guò)有濾過(guò)頭,、內(nèi)徑2mm的聚四氟乙烯管流入高壓泵進(jìn)入色譜柱,，后自檢測(cè)器流出或收集或作廢液回收,。用流動(dòng)相洗脫的方式有恒溶劑脫洗法，即自洗脫開(kāi)始到結(jié)束,，溶劑的配比恒定,。

　　另一類(lèi)為梯度洗脫法,即使溶劑的極性強(qiáng)度在色譜過(guò)程中逐漸增加。須按一定程序不斷改變流動(dòng)相的濃度配比,，從而使同一個(gè)試樣中組分性質(zhì)相差較小的及較大的都能在一次色譜過(guò)程中很好分離,，而整個(gè)色譜過(guò)程縮短。必須注意,，梯度洗脫法不能用于分子排阻色譜及用電化學(xué)檢測(cè)的反相液相色譜法中,。

　　3、檢測(cè)器適用于血藥濃度的檢測(cè)器有紫外線吸收,，熒光發(fā)射和電化學(xué)三種,。紫外檢測(cè)器應(yīng)用于對(duì)紫外光有吸收的藥物，大多數(shù)藥物分子對(duì)紫外光有吸收,，故能較普遍采用,，檢測(cè)限有0.1μg左右。液相色譜儀有固定波長(zhǎng)型,、可變波長(zhǎng)型及掃描器,，既能使流動(dòng)相停流作組分的定性定量檢測(cè)，又能提高測(cè)定靈敏度,，重現(xiàn)性較好,。熒光發(fā)射檢測(cè)器對(duì)能產(chǎn)生熒光的藥物才能使用。

　　光強(qiáng)度增加了3~4倍,，對(duì)某些藥物的檢測(cè)限可達(dá)pg級(jí),。電化學(xué)檢測(cè)器是由一個(gè)碳糊或破碳做成的蒲層電解池。常用于檢測(cè)兒茶酚胺類(lèi)及有酚類(lèi)基團(tuán)的各種藥物和代謝物,。流出組分進(jìn)入2μl的薄層電解池,，在一暄電壓下電解產(chǎn)生電流，放大后檢測(cè),，檢測(cè)限pg級(jí),。

　　4、數(shù)據(jù)處理現(xiàn)代液相色譜儀帶有數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),，除記錄譜外,，還能自動(dòng)記錄峰的保留時(shí)間，能自動(dòng)積分求算峰面積,，并能按照預(yù)定的程序作有關(guān)計(jì)算,，報(bào)告分析結(jié)果。

　　高效液相色譜儀在條件(流動(dòng)相、固定相,、溫度和壓力等)一定,，樣品濃度很低時(shí)(Cs,、Cm很小)時(shí),，K只取決于組分的性質(zhì)，而與濃度無(wú)關(guān),。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件,，在這種條件下，得到的色譜峰為正常峰;在許多情況下,，隨著濃度的增大,，K減小，這時(shí)色譜峰為拖尾峰;而有時(shí)隨著溶質(zhì)濃度增大,，K也增大,，這時(shí)色譜峰為前延峰。因此,，只有盡可能減少進(jìn)樣量,，使組分在柱內(nèi)濃度降低，K恒定時(shí),，才能獲得正常峰,。