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干貨 | HPLC柱前衍生和柱后衍生
1,、為什么要衍生
衍生化主要的目的就是提高目的物的可檢測(cè)性,。對(duì)于GC來(lái)講,多數(shù)是為了增強(qiáng)目的物揮發(fā)性或者改善目的物極性,;對(duì)于HPLC來(lái)講多數(shù)是為了提高檢測(cè)器對(duì)目的物的相應(yīng),。
2,、衍生化分類
柱前衍生和柱后衍生。柱前衍生是在經(jīng)過(guò)分析柱前使分析物與衍生劑反應(yīng),,反應(yīng)產(chǎn)物在分析柱上實(shí)現(xiàn)分離,,實(shí)際分離的是衍生產(chǎn)物,檢測(cè)的也是衍生產(chǎn)物,;柱后衍生是分離物在分析柱中實(shí)現(xiàn)分離后,,在衍生池內(nèi)與衍生劑反應(yīng),在柱子中分離的是目的物,,在檢測(cè)器處檢測(cè)的衍生產(chǎn)物,。
3、適用的化合物
生物酸/堿,、胺類,、抗生素(聚醚類抗生素多見(jiàn))和氨基酸類。
4,、衍生化要求
4.1 衍生劑必須過(guò)量且穩(wěn)定,;不過(guò)量反應(yīng)不*,檢測(cè)不充分,。不穩(wěn)定,,重現(xiàn)性差。
4.2 衍生物,、衍生產(chǎn)物和衍生副產(chǎn)物至少是好分離的,。
4.3 衍生反快速*。反應(yīng)慢,,柱前衍生還可以,,但柱后不行。因?yàn)榱魉俟潭?,衍生池管路長(zhǎng)度一定,,留給衍生化的時(shí)間是一定的。柱前衍生可以在系統(tǒng)外等衍生完畢后進(jìn)樣,,但也是影響效率的,。
5、兩種衍生比較
柱前衍生優(yōu)點(diǎn)是,,對(duì)設(shè)備要求不高,,可以手工衍生,而且對(duì)衍生時(shí)間要求相對(duì)寬泛,。缺點(diǎn)是,,引入了過(guò)多的物質(zhì),如:衍生劑,、衍生產(chǎn)物(當(dāng)然這個(gè)是檢測(cè)需要的)和衍生副產(chǎn)物,,對(duì)柱子有潛在的負(fù)面影響,,另如采用手工衍生也會(huì)引入過(guò)多的認(rèn)為因素。
柱后衍生優(yōu)點(diǎn)是,,重現(xiàn)性好,,認(rèn)為因素少,引入物質(zhì)比較少,。缺點(diǎn)是,,可能有擴(kuò)散問(wèn)題,在柱子中分離結(jié)束后,,就存在擴(kuò)散,,如果衍生慢(必然流速低)、管路長(zhǎng)擴(kuò)散問(wèn)題就會(huì)比較嚴(yán)重,,再有就是要求有一套外源的泵系統(tǒng)和一個(gè)檢測(cè)池,,對(duì)于設(shè)備要求較高。