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液相色譜柱選擇的方法及考慮因素
在選擇液相色譜柱時,，首先應(yīng)確定分離目的確定你的應(yīng)用是否要求高分離度,、短分析時間、高靈敏度,、長柱壽命,，低的實驗成本等。其次,，評估分析物的化學(xué)性質(zhì)評估分析物的化學(xué)性質(zhì)..諸如化學(xué)結(jié)構(gòu),、溶解性、穩(wěn)定性等。然后選擇合適的色譜柱了解色譜填料的物理和化學(xué)性質(zhì),。
1、填料基質(zhì)
硅膠基質(zhì)：純度高本錢低,，強度大,，化學(xué)修飾輕易，但pH值范圍有限,。大多硅膠基質(zhì)填料在pH2-8之間穩(wěn)定,，但經(jīng)過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩(wěn)定在pH1.5-10。
聚合物基質(zhì)：應(yīng)用pH值范圍寬,，溫度穩(wěn)定(高溫可以達(dá)到80度以上),，機械強度小。
2,、顆粒外形
大多現(xiàn)代HPLC填料都是球形顆粒,，但有時是不規(guī)則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓,、較高的柱效和穩(wěn)定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動相時;不規(guī)則顆粒有較大比表面積和相對低廉的價格,。
3、顆粒粒徑
粒徑越小柱效越高,、分離度越高,，但同時會導(dǎo)致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復(fù)雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱,。
4,、含碳量
含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例，與比表面積和鍵合覆蓋度等有關(guān),。高含碳量進步柱容量,、分辨率及分析時間，用于要求高分離度的復(fù)雜樣品;低含碳量分析時間短,、展現(xiàn)不同的選擇性,，用于快速分析簡單樣品及需要高含水活動相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等,。
5,、孔徑和比表面積
HPLC吸附介質(zhì)是多孔的顆粒，盡大多數(shù)的反應(yīng)表面于孔內(nèi),。因此,，分子必須進進孔內(nèi)才能被吸附和分離。
孔徑和比表面積是相輔相成的兩個概念,?？讖叫”缺砻娣e大，反之亦然。比表面積大,，增加樣品與鍵合相之間的反應(yīng),，增加保存,上樣量和復(fù)雜成分的分離度;比表面積小，平衡時間快,，適合梯度分析,。
6、孔容和機械強度
孔容,，又稱“孔體積”,。指單位顆粒的空隙體積大小。它能很好的反應(yīng)填料的機械強度,?？左w積大的填料相對孔體積小的填料機械強度要略弱?？左w積為1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分離,，而孔體積大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色譜和低壓色譜。
7,、封端封端
封端能夠降低極性堿性化合物由于與裸露的硅醇基相互作用而產(chǎn)生的拖尾峰,。不封端鍵合相相對封端鍵合相會產(chǎn)生不同的選擇性，尤其是極性樣品,。