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食品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)
一,、樣品處理技術(shù)
食品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)水平不僅依賴于檢測(cè)儀器設(shè)備，同時(shí)決定于樣品處理水平,，樣品處理在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中具有重要地位,。
1. 食品中農(nóng)藥殘留提取方法
食品農(nóng)藥殘留檢測(cè)中，根據(jù)樣品不同采用的提取方法有：浸漬法,、漂洗法,、振蕩法、消化法,、超聲波萃取法,、－索氏提取法及高速均質(zhì)法等。
浸漬法,、漂洗法,、振蕩法樣品處理時(shí)間較長(zhǎng)，且回收率相對(duì)不高,，已不太常用,。消化法需加入消化劑并加熱處理，易使部分農(nóng)藥分解,，故不常用,。
索氏提取法：為經(jīng)典提取方法，其方法是將破碎樣品預(yù)先包好放入索氏提取器中,，在圓底燒瓶中加入提取劑（有機(jī)溶劑）,，加熱使索氏提取劑揮發(fā)并在索氏提取中冷凝下來，浸泡提取樣品,，使其農(nóng)藥殘留物等浸出,。當(dāng)提取液達(dá)到一定高度自動(dòng)流回到圓底燒瓶中，如此連續(xù)提取數(shù)小時(shí),，提取效果好,，是上的標(biāo)準(zhǔn)方法。但樣品處理時(shí)間太長(zhǎng),，干擾物質(zhì)較多,，不適用于多殘留快速檢測(cè)。
超聲波提取法,，將樣品粉碎后加入提取劑,，在超聲波儀上提取5min～15min。該方法具有提取效果好,，時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn),，已普遍采用。
高速均質(zhì)提取法：將切碎的樣品加入提取劑在高速均質(zhì)機(jī)上均質(zhì)數(shù)分鐘，在樣品極細(xì)顆粒狀態(tài)下萃取農(nóng)藥殘留,。此方法簡(jiǎn)便,、快速且提取效果好，為美國(guó),、歐洲及我國(guó)農(nóng)藥殘留檢測(cè)普遍采用的方法,。
2. 提取液凈化方法
常用凈化方法有：液－液分配法、吸附柱層析法,、磺化法,、凝結(jié)沉淀法、冷凍法,、固相萃取凈化法,、凝膠色譜凈化法等。
固相萃取凈化技術(shù)（SPE）：通過流動(dòng)相中樣品的不同組分在固定相上吸附能力的不同有選擇地將農(nóng)藥殘留物吸附,，然后再選擇適當(dāng)溶劑將其洗脫,，從而達(dá)到提取、凈化的目的,。它可以將樣品萃取,、凈化，而且可以將所需樣濃縮,。因此更適用于微量,、痕量農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。
凝膠滲透色譜純化系統(tǒng)（GPC）：適用于凈化大分子物質(zhì),。GPC凈化系統(tǒng)主要用于水果,、奶類、蔬菜,、糧食,、肉類、茶葉,、煙草,、食用油的農(nóng)殘樣品處理凈化。
二,、食品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法
1. 食品中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法
（1） 免疫檢測(cè)技術(shù)
用于農(nóng)藥殘留的免疫檢測(cè)技術(shù)有放射免疫分析（RIA）和酶免疫分析（EIA）兩種,。兩種技術(shù)基本原理相同，即抗原與抗體反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物,。RIA技術(shù)以放射性同位素作指示劑,，然后用γ射線探測(cè)儀或閃爍計(jì)數(shù)器測(cè)定γ射線或β射線的放射強(qiáng)度。而在EIA技術(shù)中,，用生物酶作標(biāo)記物,。酶與底物發(fā)生特異性反應(yīng),，生成的產(chǎn)物與另一種物質(zhì)產(chǎn)生顏色反應(yīng)或使紫外吸光值發(fā)生改變，用分光光度計(jì)測(cè)定底物液吸光值變化推算出被測(cè)物濃度,。
RIA由于使用放射性物質(zhì),，檢測(cè)設(shè)備昂貴且需要防輻射設(shè)備，并且需要專業(yè)技術(shù)人員操作,，應(yīng)用前景受到一定限制,。EIA技術(shù)相對(duì)RIA技術(shù)具有靈敏度高，特異性強(qiáng),，成本低，簡(jiǎn)便快捷,，自動(dòng)化程度高,，檢測(cè)方法多樣并且安全等優(yōu)點(diǎn)。EIA技術(shù),，尤其是酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）,，已成為目前使用zui普及的免疫分析技術(shù)。
我國(guó)20世紀(jì)90年代開始農(nóng)藥免疫檢測(cè)技術(shù)研究,，主要是ELISA方法,。目前我國(guó)學(xué)者在這領(lǐng)域仍處于摸索階段,，在分子農(nóng)藥與載體蛋白的聯(lián)結(jié),，抗體的制備，ELISA檢測(cè)條件摸索和試劑盒研制等方面與國(guó)外比還有很大差距,。目前國(guó)外已研制出幾十種農(nóng)藥的酶免檢測(cè)試劑盒,，包括有機(jī)磷、氨基甲酸酯類,、硫化氨基甲酸酯,、有機(jī)氯類、三嗪類,、擬除蟲菊酯類及酰胺類等,。
（2） 酶化學(xué)法
20世紀(jì)90年代，我國(guó)學(xué)者將醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液中膽堿酯酶檢測(cè)原理應(yīng)用于農(nóng)藥殘留快速檢測(cè),。目前有速測(cè)卡法和酶抑制率法,。酶化學(xué)法優(yōu)點(diǎn)是投資少，速度快,，操作簡(jiǎn)便,。其缺點(diǎn)是定量不夠準(zhǔn)確,，只能測(cè)出總量,，不能檢出具體農(nóng)藥品種。因此酶化學(xué)法適用于批發(fā)市場(chǎng)篩選抽查,，生產(chǎn)基地自查,，也適用于大型儀器檢出前粗選,。我國(guó)蔬菜、水果不得檢出的農(nóng)藥品種,，幾乎都是高毒、高殘留的有機(jī)磷類,、氨基甲酸酯類殺蟲劑,。因此酶化學(xué)法對(duì)快速檢測(cè)蔬菜、水果中農(nóng)藥殘留,，初步判斷其質(zhì)量安全狀況,，防止因食用蔬菜、水果而發(fā)生農(nóng)藥急性中毒具有一定意義,。2001年農(nóng)藥殘留速測(cè)卡法和酶抑制率法被制定為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)推薦方法,。
a、 速測(cè)卡法
基本原理：膽堿酯酶可催化靛酚乙酸酯水解為乙酸與靛酚（呈藍(lán)色）,，而有機(jī)磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥可抑制膽堿酯酶的活性,，使催化水解,，變色過程發(fā)生改變。由此推斷蔬菜中是否含此類農(nóng)藥,。
檢測(cè)：選取有代表性樣品,，剪切成1cm見方碎片。取5g放入帶蓋瓶中,，加入10ml緩沖液,，振搖50次，靜置2min,，取速測(cè)卡,，白色要片沾取提取液，放置10min以上,，將卡對(duì)折,，用手捏3min，使紅色藥片與白色藥片疊合發(fā)生反應(yīng),。白色藥片不變色或略有藍(lán)色,，均為陽性,，變?yōu)樯钏{(lán)或與空白對(duì)照卡相同為陰性。
b,、 酶抑制率法（分光光度法）
基本原理：膽堿酯酶可使乙酰膽堿水解生成膽堿和乙酸,，水解產(chǎn)物與顯色指示劑作用使溶液顯色。有機(jī)磷及氨基甲酸酯類農(nóng)藥可以抑制膽堿酯酶活性,。如果膽堿酯酶活性被*抑制則不能使乙酰膽堿水解,，不能與顯色劑作用，溶液為無色,；如果活性部分被抑制,，乙酰膽堿部分，溶液顏色比空白溶液淺,。用分光光度計(jì)在一定波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度的變化算出酶抑制率,，從而推算出農(nóng)藥殘留含量。抑制率用式（1）表示：
I =（A0-At）/A0×100％ （1）
式中： I —— 抑制率,；
A0 —— 正常值（空白值）吸光度；
At —— 樣品溶液吸光度,。
目前采用的酶有乙酰膽堿酯酶和丁酰膽堿酯酶,。底物有乙酰膽堿、丁酰膽堿,、氯代乙酰膽堿及硫代乙酰膽堿等,，顯色劑一般采用5，5’－二硫代雙（2－硝基苯甲酸）,。
2. 氣象色譜法（GC）
氣象色譜法具有選擇性高,，分離效果好，高靈敏度等優(yōu)點(diǎn),，是目前采用zui多的方法,，約占文獻(xiàn)報(bào)道檢測(cè)方法70％以上。我國(guó)農(nóng)殘檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)80％以上為氣相法,，氣相色譜用于農(nóng)藥殘留分析的檢測(cè)器主要有ECD,、NPD、FPD等,，色譜柱大多采用毛細(xì)管柱,，檢測(cè)農(nóng)藥類別有有機(jī)氯、有機(jī)磷,、擬除蟲菊酯及氨基甲酸酯等,。
3. 液相色譜法（HPLC）
主要用于熱穩(wěn)定性差，氣化困難的農(nóng)藥殘留檢測(cè),，如除蟲脲,、滅幼脲等,。由于紫外檢測(cè)器與氣象色譜檢測(cè)器相比靈敏度低，主要用于少量氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留檢測(cè),，如西維因等,。熒光檢測(cè)器靈敏度雖有提高，但樣品需采用衍生化技術(shù),，樣品處理繁瑣,，時(shí)間較長(zhǎng)，且成本較高,，適用農(nóng)藥品種較少,。
4. 食品中農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)
農(nóng)藥多殘留快速檢測(cè)技術(shù)是指一次樣品處理采用一種或多種類型儀器同時(shí)進(jìn)行幾十種，甚至上百種農(nóng)藥殘留檢測(cè),。我國(guó)20世紀(jì)90年代末由農(nóng)業(yè)部環(huán)保所引進(jìn)美國(guó)農(nóng)藥多殘留快速掃描檢測(cè)技術(shù)（MRSM）并結(jié)合中國(guó)國(guó)情進(jìn)行了改進(jìn),。
該技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單，節(jié)省溶劑,，檢測(cè)速度快,，檢測(cè)靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，檢測(cè)農(nóng)藥品種多達(dá)200余種,。使用檢測(cè)設(shè)備為2臺(tái)氣象色譜儀,，1臺(tái)液相色譜儀。其氣相色譜儀采用雙FPD和雙ECD檢測(cè)器及極性不同的雙柱同時(shí)測(cè)定,，定量更準(zhǔn)確,，定性更可靠。
目前,，水果蔬菜中446種農(nóng)藥多殘留測(cè)定方法和動(dòng)物組織中437種農(nóng)藥殘留測(cè)定方法已采用作性方法標(biāo)準(zhǔn),。上述標(biāo)準(zhǔn)方法均采用氣象色譜－質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)。